當(dāng)AML-193人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí)，可以凍存細(xì)胞，在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm離心5min，棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為4-6×106/ml，將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL，  規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

培養(yǎng)基：IMDM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)12200036，添加0.005 mg/ml insulin, 0.005 mg/ml transferrin 和 5 ng/ml GM-CSF,)，95%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。 生長(zhǎng)條件： 這株細(xì)胞的長(zhǎng)期生長(zhǎng)依賴GM-CSF。 10%濃度的U-87MG (ATCC HTB-14)條件培養(yǎng)基可以代替培養(yǎng)基中的GM-CSF(見(jiàn)J. Immunol. 139:3348- 3354, 1987)。

生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

AML-193人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞傳代操作步驟：

一、貼壁細(xì)胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)。

2.吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞。

3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用。

4.AML-193人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

二、懸浮細(xì)胞傳代

1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min。

2.棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液。

3.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

AML-193人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞 培養(yǎng)的過(guò)程中，經(jīng)常見(jiàn)到黑色的顆粒或小黑點(diǎn)，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？原因：

黑點(diǎn)，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢(shì)，那么就有可能是污染了，需要處理；

2、如果小黑點(diǎn)沒(méi)有增殖趨勢(shì)，且不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，也不影響實(shí)驗(yàn)的話，則可能

 a、是“黑膠蟲(chóng)”，黑膠蟲(chóng)究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭(zhēng)議。有人認(rèn)為是從血清中來(lái)的一種原蟲(chóng)，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲(chóng)”可寄生于動(dòng)物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠AML-193人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲(chóng)”與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，開(kāi)始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒(méi)有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲(chóng)的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候， 細(xì)胞生長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開(kāi)展和進(jìn)行。以前（這個(gè)至少是10年以前），很多實(shí)驗(yàn)室在養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用國(guó)產(chǎn)血清，那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過(guò)關(guān)，有所謂的“黑膠蟲(chóng)”，但是也沒(méi)有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國(guó)產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見(jiàn)了。

 b、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運(yùn)動(dòng)。

 c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)LLC    人源化細(xì)胞株    內(nèi)分泌系統(tǒng)    5x10^5    人乳腺癌細(xì)胞
LNCaP cloneFGC    人源化細(xì)胞株    內(nèi)分泌系統(tǒng)    5x10^5    人前列腺癌細(xì)胞
MCF 7    人源化細(xì)胞株    內(nèi)分泌系統(tǒng)    5x10^5    人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-231    人源化細(xì)胞株    內(nèi)分泌系統(tǒng)    5x10^5    人乳腺癌細(xì)胞
SW579    人源化細(xì)胞株    內(nèi)分泌系統(tǒng)    5x10^5    人甲狀腺鱗癌細(xì)胞
TT    人源化細(xì)胞株    內(nèi)分泌系統(tǒng)    5x10^5    人髓狀甲狀腺腫瘤細(xì)胞
C-33A    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人宮頸癌細(xì)胞
Ca Ski    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人宮頸癌細(xì)胞
HEC-1-B    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞
HeLa    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人宮頸癌細(xì)胞
HO-8910    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人卵巢癌細(xì)胞
JEG3    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人絨毛膜癌細(xì)胞
KLE    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞
OVCAR-3    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人卵巢腺癌細(xì)胞
Siha    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人子宮頸鱗癌細(xì)胞
SK-OV-3    人源化細(xì)胞株    生殖系統(tǒng)    5x10^5    人卵巢腺癌細(xì)胞
BEL-7404    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人肝癌細(xì)胞
BGC-823    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人胃腺癌細(xì)胞
BxPC-3    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人胰腺腺癌細(xì)胞
Caco-2    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
chang liver    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人張氏肝細(xì)胞
DLD-1    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞
ECA109    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人食管癌細(xì)胞
HCCLM3    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞
Hep G2    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人肝癌細(xì)胞
Hep-3B    人源化細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    人肝癌細(xì)胞

上海澤葉生物科技有限公司是一家服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域的高新技術(shù)企業(yè)，主要為科研機(jī)構(gòu)、高校、院所及企業(yè)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)研究提供所需要的科研類(lèi)試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)等。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、材料科學(xué)，通用試劑、藥物合成試劑、手性化合物、催化劑及配體、分析試劑、生物試劑，檢測(cè)試劑等等。
    澤葉生物事業(yè)朝氣蓬勃，公司坐落在松江區(qū)設(shè)有生產(chǎn)研發(fā)基地和龐大的倉(cāng)儲(chǔ)物流中心，憑著一支富有創(chuàng)造天賦的專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì)，新技術(shù)、新產(chǎn)品層出不窮。目前，澤葉產(chǎn)品已達(dá)30000 多種，并呈持續(xù)增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)。旨在為科研事業(yè)和工業(yè)領(lǐng)域客戶提供系統(tǒng)的產(chǎn)品資源及配套技術(shù)服務(wù)。
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