病理技術是病理工作中的重要組成部分，它貫穿從接收樣本到發放病理報告整個診斷流程的始終。病理技術工作的質量直接影響到后期的病理分析,因此高質量的病理技術工作就顯得尤為重要。其中的關鍵是組織的處理，組織處理的好壞，直接決定了之后無論是常規HE染色還是免疫組化、原位雜交還是基因檢測的可靠性和準確性。因此組織的固定顯得及其重要，良好的固定是制作一張優良病理切片的先決條件，組織固定的好壞在制片操作中無法糾正，固定是組織處理最重要的一步。為什么要固定呢？固定是在組織離體后，用各種辦法使其細胞內的物質盡可能的接近其生活狀態時的形態結構和位置的過程。

一

組織固定的目的

1. 迅速防止組織、細胞的死后變化，防止組織自溶和腐敗，以保持組織和細胞與正常生活時的形態相似；

2. 細胞內的蛋白質、脂肪、糖、酶等各種成分轉變成不溶性物質，以保持它原有的結構與生活時相仿；

3. 使組織中的各種物質沉淀和凝固起來而產生不同的折射率，造成光學上的差異，以便染色后易于鑒別和觀察；

4. 固定劑兼有硬化作用，使組織硬化，增加組織硬度，便于制片；

5. 防止細胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態結構；

6. 經過固定的組織，能對染料產生不同的親和力而著色清晰，便于辨認。

二

病理取材基本要求

1．病理檢查應分層次進行，先進行一般外觀觀察，后剖檢觀察，再進行光鏡詳細檢查。

2．通常選擇正常與病變交界處組織，即包括病變本身及病變周圍組織。

3．對照組動物相同器官取材時，選材部位應盡量一致。

4．肉眼看不到明顯病變時，各實驗組選取標本位置應一致。

5．所選組織應包括臟器全部層次結構或重要結構，如腎應包括皮質、髓質和腎盂。

6．胃腸標本應將內容物沖洗掉，以免內容物影響組織固定，產生自溶。

7．所取材料應盡量保持肉眼標本的完整性，不宜過厚或過薄，一般厚3-5mm，大小為1.5～2厘米。

8．切取組織時不要擠壓，使用鋒利刀具，少用剪刀，勿選用被器械鉗壓過的部位。

9．標本取材要熟悉，盡可能快地完成整個過程，特別是易自溶的組織，如腸道、腦、腺體等。

三

組織固定的注意事項

1.固定必須及時。組織一經離體后，必須立即固定(在30分鐘內)。

2.固定液的選擇。固定液的選擇非常重要，應該根據制作要求選擇合適的固定液。最常用的固定液是4%多聚甲醛液或10%福爾馬林。

3.組織固定容器要選擇大一些的，固定液的量必須大于組織體積的5—10倍以上。

4.固定液的濃度。固定液的濃度必須準確，過稀或過濃都會影響組織的形態和固定效果。

5.固定液的質量：要注意固定液的有效期。發現固定液變質，如甲醛液體產生白色沉淀,應立即更換。

6.固定的溫度：過高，會加快組織的自溶和組織的過度收縮，并破壞細胞內的抗原。

7.固定的時間：新鮮標本應該剖開固定12—24小時后再取材。大標本取材后在室溫下需再固定4—6小時。小標本取材后應該在室溫下再固定3—4小時；如果是新鮮小標本取材,必須再固定4—8小時。如果室內溫度過低,固定時間還需延長。需要做免疫組化或分子病理的標本，從標本離體至組織脫水開始,總固定時間一般不要超過48小時,但也不要少于24小時(厚度2—3m)為佳。

       固定是病理制片過程中最重要的一步，因為這是不可逆的，也就是無法補救的。由于組織固定不佳，會造成組織腐爛、抗原丟失，將影響切片質量，也將導致診斷困難或無法診斷，甚至影響免疫組化及基因檢測結果準確性，因此規范、合理的標本管理非常重要。