細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

CRMP4/DRP3  腦衰蛋白反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白4抗體 0.2ml
UBTD1  泛素結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
GLO1  乙二醛酶1抗體 0.1ml
P73 protein  P73腫瘤抑制基因抗體 0.1ml
phospho-Dnmt1(Tyr969)  磷酸化DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.1ml
Phospho-SATB1 (Ser47)  磷酸化核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml
Twist2  TWIST蛋白2抗體抗體 0.2ml
STIL  中斷位點(diǎn)蛋白STIL抗體 0.2ml
HDHD3  HDHD3蛋白抗體 0.2ml
phospho-CDKN1A/P21 (Ser146)  磷酸化p21蛋白抗體 0.1ml
GABRA3/GABA A Receptor alpha 3  G氨基受體α3抗體 0.2ml
羊藿次苷I（95%） CAS  規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
紫蘇烯 CAS 539-52-6 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
鳶尾苷元磺酸鈉;tectorigenin CAS 548-77-6 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
（R型）人參皂苷Rg3GINSESI CAS  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢
紫蘇醇 CAS 536-59-4 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
多根堿 CAS 39089-30-0 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg/支 訂購|咨詢
人甲狀腺鱗癌細(xì)胞；SW579培養(yǎng)7-甲氧基香;7-Methoxyco CAS 531-59-9 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
對氨基水楊酸異煙肼 CAS 2066-89-9 規(guī)格： 100mg 訂購|咨詢
青藤堿 CAS 115-53-7 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
7-乙基-10羥基喜樹堿 CAS 119577-28-5/86639-52-3 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
香紫蘇醇 CAS 515-03-7 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
菌唑;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 88671-89-0 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。

第二種：

是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。

質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的細(xì)胞名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。