運輸和保存:
人視網膜母細胞瘤;Y79培養視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養,如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿完全培養基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

細胞名稱
人視網膜母細胞瘤;Y79培養
形態特性 圓形,成簇生長
生長特性 懸浮生長
特征特性 1971年1月,該細胞由Reid TW及其同事從病人右眼切除的腫瘤進行原代培養建立而成,此病人有很強的視網膜母細胞瘤的母系家族遺傳性。該細胞的超微結構,如核膜內折、三層膜結構、大的被膜小泡、環孔板、微管、中心粒、基粒等都與原始腫瘤相似。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 20%FBS
傳代方法 1:2~1:4傳代,每周2次換液。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR
同工酶
染色體 40~49
細胞特性:
5)細胞生長方式:上皮樣,不規則細胞,貼壁培養。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態,細胞最好在對數生長期,細胞密度適合,剛剛發生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培養基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節約處就節約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍”,傳統的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。

phospho-eIF4EBP1/4EBP1(Ser65/Thr70) 磷酸化eIF4E結合蛋白抗體 0.1ml
NGB/neuroglobin 腦紅蛋白/神經血紅蛋白/神經球蛋白抗體 0.1ml
BRCA1/BAP1 乳腺癌易感基因1抗體 0.1ml
C3orf18 3號染色體開放閱讀框18抗體 0.2ml
phospho-IKK beta(S474) 磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體 0.1ml
KCNC4/KV3.4 離子通道蛋白Kv3.4抗體 0.2ml
CCDC98 卷曲螺旋結構域蛋白98抗體 0.2ml
HEF1 蛋白激酶底物相關蛋白抗體 0.2ml
Wnt3a 信號通路Wnt3a抗體 0.1ml
phospho-Smad3(Ser213) 磷酸化細胞信號轉導分子SMAD3抗體 0.1ml
BBC3/PUMA p53正向細胞凋亡調控因子抗體 0.1ml
細辛脂素 英文名稱 Asarinin 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥95%
夏佛塔苷 英文名稱 Schaftoside 規格: 20mg/支進口/國產 含量: 95%
仙茅苷 英文名稱 curculigoside 規格: 20mg/支進口/國產 含量: 98%
人視網膜母細胞瘤;Y79培養腺苷 英文名稱 Adenosine 規格: 20mg/支進口/國產 含量: 98%
香素 英文名稱 coumarin 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥98%
相思豆堿 英文名稱 alpha-Methyl-L(+)-tryptophan 規格: 20mg/支進口/國產 含量: 95%
香草酸 英文名稱 Vanillic acid 規格: 20mg/支進口/國產 含量: 98%
香蒲新苷 英文名稱 Typhaneoside 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥98%
香蘭素 英文名稱 Vanillin 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥98%
香葉木素 英文名稱 Diosmetin 規格: 20mg/支進口/國產 含量: 95%
可以重發的情況有哪些?
(1)人視網膜母細胞瘤;Y79培養細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發;
(2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數細胞未存活,重發;
(3)存活的細胞靜置24小時后,絕大多數細胞未存活,重發;
(4)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,出現污染,重發;
(5)視具體情況而定。
出現問題,不予以重發的情況有哪些?
(1)人視網膜母細胞瘤;Y79培養客戶造成細胞污染,不重發;
(2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發;
(3)細胞狀態不好,未細胞培養前3天照片的,不重發;
(4)細胞培養時經其它處理的,不重發;
(5)細胞收到2天內,未告知,不重發;