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細胞名稱
人胚腎細胞;293 Cells, low passage說明書
形態(tài)特性 上皮細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 293細胞是人胚胎腎細胞用剪切過的腺病毒5 DNA轉(zhuǎn)化得到。它們包含并表達腺病毒5的早期區(qū)段1。 它們包含并表達腺病毒5的早期區(qū)段1。 它們能互補E1失活的腺病毒突變株和載體,使其生長。 在DNA轉(zhuǎn)染檢測中它們是特別有效的受體細胞。 對于大多數(shù)即使不是全部人腺病毒的生長和溶菌斑測試,它們也表現(xiàn)很好。 這些細胞廣泛應用于因缺失或代換E1序列引起的E1失活突變株和腺病毒載體的繁殖與滴定。 因此它們被用來構(gòu)建腺病毒載體。 用于構(gòu)建腺病毒載體最好使用低代數(shù)細胞,一般不超過40代。 對于保持這株細胞的優(yōu)良特性,正確
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 P(27+5)
凍存條件 完全培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備
記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領域較為寬廣,如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。
CHKL/Ethanolamine kinase beta 激酶β抗體 0.2ml
phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser178) 磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體 0.1ml
CX3CL1 CX3CL1抗體 0.2ml
CACNA1A/Cav2.1 電壓依賴性鈣通道Cav2.1抗體 0.2ml
Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗牛IgG 0.1ml
Hamartin/TSC1 結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體 0.1ml
NPFF/FMRFamide 痛覺調(diào)節(jié)肽NPFF抗體 0.2ml
ART5 二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶5抗體 0.2ml
Sigma1R 衰老相關基因8蛋白抗體 0.2ml
FGF6 纖維母細胞生長因子6抗體 0.1ml
phospho-Crkl (Tyr207) 磷酸化接頭蛋白CrkL抗體 0.1ml
漆黃素(非瑟酮/紫鉚素) 英文名稱 Fisetin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
苦玄參苷ⅠA 英文名稱 Piefeltarraenin ⅠA 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
苦玄參苷ⅠB 英文名稱 Piefeltarraenin ⅠB 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
蘆薈苷 英文名稱 barbaloin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 英文名稱 Atractylenolide Ⅲ 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
人胚腎細胞;293 Cells, low passage說明書白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ 英文名稱 Atractylenolide I 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ 英文名稱 Atractylenolide II 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
膽酸(錯誤) 英文名稱 Cholic Acid 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
毒靈 英文名稱 Bufalin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
膽紅素 英文名稱 Bilirubin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
細胞種類:
第一種:
是凍存產(chǎn)品,由液氮直接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,很難說是細胞自身不行,還是復蘇沒操作好;另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細胞儲存的zui好方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復蘇好細胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復蘇造成影響,常溫運輸也對細胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。
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