
細胞名稱
人羊膜細胞;WISH培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 最初以為這株細胞的起源是正常羊膜,但隨后通過同工酶分析、HeLa標記染色體和DNA指紋法分析,證實該細胞是HeLa細胞污染的;角蛋白陽性。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2~1:10傳代;每周換液2次。
傳代情況 P180
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:9,10;D13S317:13.3;D16S539:9,10;D18S51:16;D19S433:13,14;D21S11:27,28;D2S1338:17;D3S1358:15,18;D5S818:11,12;D7S820:8,12;D8S1179:12,13;FGA:21;TH01:7;TPOX:8,12;vWA:16,18;
同工酶
染色體 70~75,有若干變異染色體
運輸和保存:
人羊膜細胞;WISH培養(yǎng)視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
可以重發(fā)的情況有哪些?
(1)人羊膜細胞;WISH培養(yǎng)細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);
(2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);
(3)存活的細胞靜置24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);
(4)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
(5)視具體情況而定。
出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)人羊膜細胞;WISH培養(yǎng)客戶造成細胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)細胞狀態(tài)不好,未細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(4)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(5)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
細胞特性:
5)細胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態(tài),細胞最好在對數(shù)生長期,細胞密度適合,剛剛發(fā)生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍”,傳統(tǒng)的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。

C1orf67/DNAH14 1號染色體開放閱讀框67抗體 0.2ml
LC3B/MAP LC3β/MAP1A 自噬微管相關蛋白輕鏈3抗體 0.1ml
AKR1A1 乙醇脫氫酶1抗體 0.2ml
RNF43 環(huán)指蛋白43抗體 0.2ml
XBP-1 細胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體 0.1ml
FGFR4/CD334 成纖維細胞生長因子受體4抗體 0.1ml
VAM1/MPP6 棕櫚酰化膜蛋白6抗體 0.2ml
phospho-IKK beta(Tyr188) 磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體 0.1ml
phospho-ASK1(Ser1033) 磷酸化細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體 0.1ml
DIS3L 有絲分裂控制樣蛋白DIS3L抗體 0.2ml
CCDC21 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白21抗體 0.2ml
蔓荊子黃素 英文名稱 Casticin (Vitexicarpin) 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%
芒柄花素 刺芒柄花素 英文名稱 Formononetin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%
芒柄花素-7-O-葡萄糖苷 英文名稱 Fomononetin-7-O-glucoside/ononin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: 95%
芒果苷 英文名稱 Mangiferin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥95%
毛蕊異黃酮 英文名稱 Calycosin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%
人羊膜細胞;WISH培養(yǎng)莽草酸 英文名稱 Shikimic Acid 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%
毛蕊花糖苷(麥角甾苷) 英文名稱 Verbascoside 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%
沒食子兒茶素GC 英文名稱 (−)-Gallocatechin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: 97%
毛蕊異黃酮-7-O-β-D葡萄糖苷 英文名稱 calycosin-7-O-β-D-glucoside 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥97% 96%
沒食子兒茶素沒食子酸酯/ GCG 英文名稱 -GCG 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: ≥98%