基因組DNA體外完全甲基化（sss1）處理試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

基因組DNA體外完全甲基化（sss1）處理試劑是一種旨在使用CpG甲基轉移酶轉移來自供體的S－腺苷甲硫氨酸的甲基到基因組DNA或DNA片段里所有CpG島的胞嘧啶上，體外產生基因組DNA完全甲基化狀態的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種基因組DNA和雙鏈DNA片段的甲基化。應用于阻止某些內切酶的作用、甲基化依賴性基因表達等研究。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，作用完全。

技術背景

在人類基因組內，通常存在一些富含重復雙核苷酸“CG”的區域，稱為“CpG島”（CpG island），有近3萬個。這些CpG島不僅是基因的一種標志，而且還參與基因表達的調控和影響染色質的結構，更是DNA甲基化的唯一位置。CpG甲基轉移酶（M.SssI；42KD）可以使所有CpG島上的胞嘧啶（cytosine）成為甲基化狀態。常用于甲基化分析的陽性對照

產品內容

反應液（Reagent A）         50微升

補充液（Reagent B）      1.5毫升

萃取液（Reagent C） 1毫升

濃縮液（Reagent D）    500微升

助沉液（Reagent E）      5微升

沉淀液（Reagent F） 3毫升

凈化液（Reagent G） 5毫升

保存液（Reagent H） 1毫升

產品說明書           1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免反復凍融； 有效保證3月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于反應操作的容器

微型臺式離心機：用于核酸純化操作

恒溫水浴：用于反應孵育

實驗步驟

實驗開始前，將－20冰箱里的試劑置于冰槽里融化，同時準備2個恒溫水浴，分別設置為37℃和65℃。然后進行下列操作。

• 準備1個1.5毫升離心管
• 移取10微升反應液（Reagent A）
• 加入1至5微升用戶自備的DNA樣品（總量可達2微克）
• 加入適量的補充液（Reagent B）到20微升體系，混勻
• 即刻放進37℃恒溫水浴孵育2小時（注意：可以孵育4小時）
• 放進65℃恒溫水浴孵育15分鐘
• 加入200微升補充液（Reagent B）
• 加入200微升萃取液（Reagent C）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管，留下25微升相位交界面的溶液
• 加入65微升濃縮液（Reagent D）
• 加入1微升助沉液（Reagent E）
• 加入600微升沉淀液（Reagent F）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升凈化液（Reagent G）
• 放進微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 空氣中晾干
• 加入100微升保存液（Reagent H）
• 放進－20℃冰箱長期保存

注意事項

• 本產品為5次操作
• 操作時，須戴手套
• 反應液（Reagent A），嚴禁反復凍融
• DNA樣品須雙鏈結構
• DNA樣品須純化良好，不宜超過4微克
• 本公司提供系列甲基化分析實際產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定反應完全

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