非變性法蛋白沉淀試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是基于蛋白質(zhì)鹽析和透析原理開發(fā)的蛋白質(zhì)濃縮產(chǎn)品。其原理是將大量具有很強(qiáng)水化能力的硫酸銨加到蛋白質(zhì)溶液中，奪取蛋白質(zhì)分子的水化層（尤其是蛋白質(zhì)表面非極性區(qū)的水化層），使之“失水”，于是蛋白質(zhì)分子間的非極性基團(tuán)將互相結(jié)合，使蛋白質(zhì)形成沉淀，離心分離沉淀后，再用透析方法將蛋白質(zhì)中的鹽除去，即得濃縮的蛋白質(zhì)。其示意圖如下：

本產(chǎn)品以鹽析能力最強(qiáng)的硫酸銨作為蛋白質(zhì)的沉淀劑，其特點(diǎn)是：

第一步：鹽析第二步：透析

1. 適合于濃縮各種蛋白質(zhì)粗提液。

2. 非變性法，不會破壞蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)和活性，尤其是適用于對變性敏感的酶溶液。

3. 得到的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，適合于長期保存。

4. 可以在透析是進(jìn)行緩沖液的調(diào)換。

5. 一站式，帶有鹽析和透析所需的物品。

使用及效果

按每mL蛋白質(zhì)溶液加入1克硫酸銨的比例將兩者分多次混合，放置10分鐘后離心，棄上清后加適量緩沖液中，轉(zhuǎn)移到100倍體積的透析液中透析兩次。每次3-4小時(shí)即得濃縮的蛋白質(zhì)溶液。

非變性法蛋白沉淀試劑盒細(xì)菌的培養(yǎng)和收集：

將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對數(shù)生長后期。

非變性法蛋白沉淀試劑盒質(zhì)粒DNA少量快速提取：

質(zhì)粒DNA小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡便、快速，能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　非變性法蛋白沉淀試劑盒（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。

　　8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。

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