鹽酸四環素干粉產品及特點
鹽酸四環素分子式為C22H24N2O8·HCl,分子量為480.91。黃色結晶,無氣味。味苦。易吸濕。遇光色漸變深。易溶于水,溶于甲醇、乙醇,不溶于羥類。它是從放線菌金色鏈叢菌(Streptomycesaureofaciens )的培養液中分離出來的抗菌物質,對革蘭氏陽性菌、陰性菌、立克次體、濾過性病毒、螺旋體屬乃至原蟲類都有很好的抑制作用,對結核菌、變形菌等則無效。
低溫運輸、4℃干燥避光保存,有效期一年。
鎂離子是四環素的拮抗劑,四環素抗性菌的篩選應使用不含鎂鹽的培養基(如LB培養基)。
鹽酸四環素干粉細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
鹽酸四環素干粉質粒DNA少量快速提。
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
鹽酸四環素干粉(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY130840硫酸鎂溶液,10mM,PCR級5mLXY130841石蠟油,PCR級10mLXY80205DMSO,PCR級1.5mLXY130506海藻糖溶液,1.5M,PCR級1.5mLXY70902甜菜堿溶液,5M,PCR級1.5mLXY70909綠如藍染料,PCR級0.1mL|1mLXY51208dNTP溶液,10 mM0.5mL(B)|5mL(B)XY131038dUTP溶液,100 mM0.4mLXY130920dITP溶液,100mM0.5mLXY120615dATP溶液,100mM0.5mLXY120617dTTP溶液,100mM0.5mLXY120619dGTP溶液,100mM0.5mLXY130917dCTP溶液,100mM0.5mLXY131139Deaza dGTP溶液,5mM0.4mLXY131140雙脫氧dNTP溶液,10mM40uL×4XY131141dNTP和引物清除劑100次XY131212PCR Mix染料10mLXY60901可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑0.3mLXY130815Taq酶抗體250U|1000UXY130601DNA 修復混合液30次|150次XY70802即用型PCR試劑盒2.0100次|600次