Tuner(DE3)plysS菌種產(chǎn)品及特點(diǎn)

Tuner系列菌株是LacZY去除的BL21突變菌株，這可以通過細(xì)胞培養(yǎng)來調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)水平。Tuner系列菌株是lon和ompT蛋白酶缺陷型菌株。

Tuner（DE3）plysS菌株的蛋白表達(dá)水平可以通過IPTG濃度進(jìn)行精確的調(diào)節(jié)，具有嚴(yán)格的濃度依賴性。Tuner（DE3）plysS菌株含有的DE3是溶源性的 λDE3，在lacUV5啟動(dòng)子下攜帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。Tuner（DE3）plysS含有的pLSs質(zhì)粒能產(chǎn)生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基礎(chǔ)表達(dá)水平。pLySs質(zhì)粒使得該菌株具有氯霉素抗性。pLySs質(zhì)粒的起始復(fù)制位點(diǎn)是p15 Origin, 使得該質(zhì)粒能夠和pUC-及pBR322-衍生的質(zhì)�；ハ喙泊�。該菌株適用于pET系列載體及其他T7啟動(dòng)子系列載體。

其基因型如下：

F-omp T hsd SB(rB-mB-) gal dcm lac Y1(DE3) plysS(CamR)

低溫運(yùn)輸，-80℃保存，有效期一年。

Tuner(DE3)plysS菌種細(xì)菌的培養(yǎng)和收集：

將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對(duì)數(shù)生長后期。

Tuner(DE3)plysS菌種質(zhì)粒DNA少量快速提�。�

質(zhì)粒DNA小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡便、快速，能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　Tuner(DE3)plysS菌種（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。

　　8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。

XY2601    DNAzol 基因組DNA快速提取試劑    50ml/100ml
XY3201    石蠟包埋組織DNA快速提取試劑盒    50次/100次
XY3601    尿液基因組DNA快速提取試劑盒    50次
XY3701    海洋動(dòng)物組織基因組DNA快速提取試劑盒    50次/100次
XY4201    蛋白酶K    100mg
XY3301    2 x SYBR Green qPCR Mix (Sybr green熒光染料法定量PCR)    50次×50μl/200次×50μl
XY3901    2 x Real Time PCR Mix (Probe熒光探針法定量PCR)    40次×50μl/200次×50μl
XY3601    TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit (兩步法熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒)    25次×50μl/50次×50μl
XY4601    THERMOscript SYBR Green qRT-PCR Kit(兩步法熒光定量耐熱反轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒)    25次×50μl/50次×50μl
XY4101    TUREscript One Step qRT-PCR Kit (一步法熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒)    50次×50μl/100次×50μl

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