Stbl2菌種產品及特點
Stbl2菌株來源于JM109菌株,Stbl2是不穩定質粒DNA例如逆病毒質粒或者含有高度重復序列質粒的優秀克隆擴增菌株。最大能夠適用于>20kb質粒的擴增。Stbl2不含有ccdB抗性基因,不能用來擴增含ccdB基因的質粒。Stbl2含有recA1重組酶缺陷,能夠有效防止質粒和基因組的重組發生率。Stbl2含有endA1限制性內切酶缺陷,能夠有效提升質粒抽提的質量。
Stbl2菌株內的mcrA基因突變和mcrBChsdRMS-mrr缺失,允許細胞克隆擴增含有甲基化序列的DNA質粒或者基因組。Stbl2菌株不能被用于藍白斑篩選。
其基因型如下:
F- mcr A Δ(mcr BC-hsdRMS-mrr ) rec A1end A1lon gyr A96 thi sup E44 rel A1 λ-Δ(lac -pro AB)
低溫運輸,-80℃保存,有效期一年。
Stbl2菌種細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
Stbl2菌種質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
Stbl2菌種(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY880927 大提柱式細菌DNAOUT 4次(A)|4次(B)
XY860806 一步式細菌DNAOUT 50次
XY870702 分枝桿菌DNAOUT 50次
XY870703 柱式分枝桿菌DNAOUT 50次
XY860701 土壤DNAOUT 30次|100次
XY871205 柱式土壤DNAOUT 50次
XY880928 大提柱式土壤DNAOUT 4次
XY8101112 柱式水樣DNAOUT 50次
XY83674 一管式病毒DNAOUT 50次|200次
XY870701 柱式病毒DNAOUT 50次
XY880921 96孔板病毒DNAOUT(離心法) 1次|5次
XY880101 一管式病毒DNA-RNAOUT 50次
XY870202 柱式酵母質粒DNAOUT 50次
XY890607 柱式BAC DNAOUT 50次
XY890608 中提柱式BAC DNAOUT 5次
XY860205 柱式質粒 DNAOUT 50次|100次
XY8120601 革氏陽性細菌質粒DNAout 50次
XY860807 柱式無內毒素質粒DNAOUT 50次