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RosettaBlue(DE3)菌種產品及特點
RosettaBlue系列菌株衍生于NovaBlue菌株, 對于包含有稀有密碼子的真核蛋白, 是加強型的蛋白表達菌株。RosettaBlue(DE3)菌株通過細胞內具有氯霉素抗性的pRARE質粒,補充提供了AGG,AGA, AUA, CUA, CCC和GGA這些稀有密碼子的tRNA。
DE3是溶源性的 λDE3,在lacUV5啟動子下攜帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。RosettaBlue(DE3)無法使用藍白斑篩選,因為在細胞中的DE3溶源噬菌體DNA序列上含有LacZ的α肽段編碼序列。該菌株適用于pET系列載體及其他T7啟動子系列載體。
其基因型如下:
endA1 hsdR17(rK12–mK12+) supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F proA+B +lacIqZΔM15 ::Tn10 ] pRARE(CamR, TetR)
低溫運輸,-80℃保存,有效期一年。
RosettaBlue(DE3)菌種細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
RosettaBlue(DE3)菌種質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
RosettaBlue(DE3)菌種(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY010 Goose鵝特定基因序列熒光PCR試劑盒 40次/盒
XY001 35S/NOS U-Plant通用型RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY002 35S/NOS Lectin通用型RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY003 大豆RR RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY004 玉米Bt11 RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY005 玉米Bt176 RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY005-1 玉米MON810 RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY006 玉米GA21 RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY006-1 玉米T25 RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY007 玉米CBH-351 RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY008 馬鈴薯Cry3c RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY009 木瓜PRSV CP RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY010 水稻Cry1Ac RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
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