細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

FAP1/PTPN13  Fas相關(guān)磷酸酶1/蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型13抗體 0.2ml
BSEP/ABCB11  膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體 0.1ml
Donkey Anti-rabbit IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1ml
CINP  CDK2相互作用蛋白抗體 0.2ml
CCDC158  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白158抗體 0.2ml
PARP  多腺苷二磷酸多聚酶抗體/多聚ADP-核糖聚合酶1 0.1ml
FAM107A  腎細(xì)胞癌下調(diào)蛋白1抗體 0.2ml
5-HTR3  5-羥色胺受體3抗體 0.1ml
CD150/SLAMF1  信號(hào)淋巴細(xì)胞活化分子CD150抗體 0.2ml
Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗水貂IgG 0.1ml
FAM76B  FAM76B蛋白抗體 0.2ml
原人參二醇 英文名稱(chēng) Protopanaxdiol  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
原人參三醇 英文名稱(chēng) Protopanaxatriol  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
人參二醇 英文名稱(chēng) Panaxadiol  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
人盲腸腺癌細(xì)胞（未分化）；Hce-8693 [HCE8693]培養(yǎng)人參三醇 英文名稱(chēng) Panaxtriol  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
刺五加甙E 英文名稱(chēng) Eleutheroside E  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
刺五加皂苷B 英文名稱(chēng) Ciwujianoside-B  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
紫丁香酚甙（刺五加甙Ｂ） 英文名稱(chēng) Syringin  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
注：（刺五加葉中） 英文名稱(chēng) Hedera saponin B  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
竹節(jié)香附素A 英文名稱(chēng) Raddeanin A  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
柴胡皂苷A 英文名稱(chēng) SaikosaponinA  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： HPLC≥98%

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶(hù)。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。

第二種：

是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿(mǎn)培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶(hù)，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。

質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于A(yíng)TCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。

購(gòu)買(mǎi)客戶(hù)請(qǐng)先與我司細(xì)胞銷(xiāo)售人員核實(shí)訂購(gòu)的細(xì)胞名稱(chēng)、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷(xiāo)售人員索取細(xì)胞說(shuō)明書(shū)并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。