
細胞名稱
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0907培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞系來源于一無精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
運輸和保存:
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0907培養(yǎng)視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
可以重發(fā)的情況有哪些?
(1)EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0907培養(yǎng)細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);
(2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);
(3)存活的細胞靜置24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);
(4)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
(5)視具體情況而定。
出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0907培養(yǎng)客戶造成細胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)細胞狀態(tài)不好,未細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(4)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(5)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
細胞特性:
5)細胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態(tài),細胞最好在對數(shù)生長期,細胞密度適合,剛剛發(fā)生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍”,傳統(tǒng)的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。

phospho-IKK beta(Ser471) 磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體 0.1ml
KCNC1 離子通道蛋白Kv3.1抗體 0.1ml
MCP-3/CCL7 單核細胞趨化蛋白3抗體 0.1ml
γ-Catenin γ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體 0.2ml
WNK4 WNK4抗體 0.1ml
ESPL1 外紡錘體極樣蛋白1抗體 0.1ml
CKMT2 肌酸磷酸激酶2抗體 0.2ml
IL-4R/CD124 白細胞介素4受體抗體IL-4Rα 0.1ml
C10orf62 10號染色體開放閱讀框62抗體 0.2ml
PBLD/MAWBP MAWD結合蛋白抗體 0.2ml
ANTXR1/TEM8 腫瘤血管內(nèi)皮標志物8抗體 0.1ml
忍冬藤 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
知母 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
狗脊 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
枸杞子 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0907培養(yǎng)桑寄生 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
胡黃連 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
萊菔子 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
積雪草 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
救必應 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量:
五倍子 英文名稱 TLC法鑒別 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: