細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

GRASP65  高爾基體外周膜蛋白p65抗體 0.2ml
Rabbit Anti-human IgM/FITC  FITC標記的兔抗人IgM 0.3ml
DAB2  信號轉導功能磷蛋白DAB2抗體 0.2ml
phospho-EGFR (Tyr1197)  磷酸化表皮生長因子受體抗體 0.1ml
phospho-P53(Thr18)  磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體 0.1ml
PDK2  酸脫氫酶激酶亞型2抗體 0.2ml
TSPAN2  四分子交聯體2抗體（四旋蛋白） 0.2ml
KIAA1576/VAT1L  囊泡胺轉運蛋白1家族蛋白抗體 0.2ml
Rabbit Anti-Monkey IgG/HRP  辣根過氧化物酶標記的兔抗猴IgG 0.1ml
BCAS2  乳腺癌相關蛋白2抗體 0.1ml
ALDH1B1  脫氫酶5抗體 0.1ml
人參皂苷Re 英文名稱   規格:  20mg/支進口/國產 含量： Ginsenoside Re
人參皂苷Rd 英文名稱   規格:  20mg/支進口/國產 含量： Ginsenoside Rd
人參皂苷Rf 英文名稱   規格:  20mg/支進口/國產 含量： Ginsenoside Rf
擬人參皂苷RT5 英文名稱   規格:  20mg/支進口/國產 含量： Pseudoginsenoside RT5
人參二醇 英文名稱   規格:  20mg/支進口/國產 含量： Panaxadiol
原人參二醇 英文名稱   規格:  20mg/支進口/國產 含量： Protopanaxdiol
EB病毒轉化的人B淋巴細胞；KMY0923說明書原人參三醇 英文名稱   規格:  20mg/支進口/國產 含量： Protopanaxatriol
刺五加皂苷B 英文名稱   規格:  20mg/支進口/國產 含量： Ciwujianoside B
人參三醇 英文名稱   規格:  20mg/支進口/國產 含量： Panaxatriol
紫丁香酚苷 英文名稱 紫丁香酚甙;刺五加甙B;紫丁香苷；刺五加苷B  規格:  20mg/支進口/國產 含量： Syringin

第一種：

是凍存產品，由液氮直接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態影響較大，一旦細胞狀態不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。

第二種：

是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。

質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的細胞名稱、種屬、貨號、數量、協商細胞價格并預約發貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。