
細(xì)胞名稱
Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣;多角
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 帶有編碼多組氨酸的Asp-2基因轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,用于阿爾茨海默病的研究;表達(dá)Asp-2基因。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS;250ug/ml G418
傳代方法 1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況 不詳
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
運(yùn)輸和保存:
Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33培養(yǎng)視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
可以重發(fā)的情況有哪些?
(1)Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33培養(yǎng)細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題,細(xì)胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);
(2)凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,重發(fā);
(3)存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,重發(fā);
(4)凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
(5)視具體情況而定。
出現(xiàn)問(wèn)題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33培養(yǎng)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)細(xì)胞狀態(tài)不好,未細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(4)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(5)細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
細(xì)胞特性:
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:上皮樣,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):
(1)凍存前細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,細(xì)胞密度適合,剛剛發(fā)生細(xì)胞融合,過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好,而且消化時(shí)不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過(guò)低,10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好,我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個(gè)細(xì)胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過(guò)度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格,我從10%-90%都用過(guò),問(wèn)題不大,個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛!另外,凍存液可以在處理細(xì)胞前配置,放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關(guān)于“慢凍”,傳統(tǒng)的方法,LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長(zhǎng),-80度過(guò)夜,最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。

PPM1G 蛋白質(zhì)磷酸酶1G抗體(PP2Cγ) 0.2ml
Caspase 5 半胱胺酸蛋白酶蛋白5抗體 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗馬IgG 0.5ml
phospho-EIF4G1(Ser1238) 磷酸化真核翻譯起始因子4G抗體 0.1ml
HER4/ErbB4 HER4抗體 0.1ml
ATP7B 銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體 0.1ml
ENAH/MENA ENAH蛋白抗體 0.2ml
Wnt11 信號(hào)通路Wnt11抗體 0.1ml
Mouse Anti-rat IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml
Gastrin receptor/GASR 促胃泌素受體抗體 0.1ml
MTUS1/Angiotensin II Type 2 Receptor 血管緊張素Ⅱ2型受體相互作用蛋白抗體 0.1ml
秦皮乙素 英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
熊果酸 英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
菝契皂苷元 英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33培養(yǎng)樟腦 英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
三七皂苷 R1 英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
馬兜鈴酸 A 英文名稱 TLC檢查 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
梔子苷 英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
α-香附酮 英文名稱 鑒別 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
貝母素甲 英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量: