細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Salmonella paratyphi a  甲型副傷寒沙門氏菌抗體 0.2ml
Dnmt1  DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.1ml
CCL9/CCL10/MIP-1 gamma/SCYA10  巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體 0.1ml
CD99/E2 antigen  CD99抗體 0.2ml
RMND5B  RMND5B蛋白抗體 0.2ml
FAM46D/CT112  腫瘤/抗原112抗體 0.2ml
MHC class I  組織相容性復(fù)合體1多肽抗體 0.1ml
BAZ/ACF1  溴區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A抗體 0.2ml
phospho-c-Jun(Thr91+Thr93)  磷酸化原癌基因c-Jun抗體 0.1ml
SIRT6  沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白6抗體 0.2ml
CD28  CD28抗體 0.1ml
羥甲香素 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： 含量測定
十一酸睪酮 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC法含量測定
石杉堿甲 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC法含量測定
雙嘧達(dá)莫 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： 檢查
消旋山莨菪堿 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： 鑒別
Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)株；293sars181A說明書魚腥草素鈉 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： 檢查
維生素B12 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： 含量測定
亞葉酸鈣 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC法含量測定
月桂氮卓酮 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： GC法含量測定
鹽酸羥甲唑啉 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： 含量測定

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。

第二種：

是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。

質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的細(xì)胞名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。