細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

RING2/RNF2  環(huán)指蛋白2抗體 0.2ml
CCDC75  卷曲螺旋結構域蛋白75抗體 0.2ml
PSD93  突觸后密度蛋白93抗體 0.2ml
BCAR1  乳腺癌抗雌激素耐藥蛋白1 0.2ml
S100B/S100 beta  S100B蛋白抗體 0.2ml
Donkey Anti-rabbit IgG/Gold  膠體金標記的驢抗兔IgG 0.5ml
RALA  Ras樣蛋白A抗體 0.2ml
MMS19  DNA修復敏感性基因19抗體 0.2ml
Histone H3  組蛋白H3抗體 0.1ml
Corin  心臟特異性絲氨酸蛋白酶抗體 0.2ml
E-Selectin/CD62E  E選擇素抗體 0.1ml
木蘭脂素 英文名稱 Magnolin  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： ≥97%
木犀草苷 英文名稱 Cynaroside  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： ≥95%
木犀草素 英文名稱 Luteolin  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： ≥98%
木香烴內(nèi)酯 英文名稱 Costunolide  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： ≥98%
鳥苷 英文名稱 GUANOSINE  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： ≥95%
人胚肺細胞系；KuMA說明書擬人參皂苷F1l 英文名稱 Pseudoginsenoside F11  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： ≥98%
擬人參皂苷-RT5 英文名稱 Pseudoginsenoside-RT5  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： ≥98%
檸檬苦素 英文名稱 Limonin  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 98%
尿囊素 英文名稱 Allantoin  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 98%
牛蒡子苷 英文名稱 Arctiin  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： ≥98%

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。

第二種：

是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。

質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的細胞名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細胞價格并預約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。