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銷售商: 上海信裕生物工程有限公司 | 查看該公司所有產品 >> |
質譜兼容型蛋白銀染試劑盒產品及特點
銀染是目前檢測PAGE電泳分離后的蛋白質的最靈敏的方法,MS(質譜)是確定未知蛋白最常用和最快捷的方法,但將銀染得到的蛋白直接用于MS分析有很多問題,其中最主要問題是常規銀染所使用的試劑(包括強氧化劑和醛類)容易使蛋白質發生化學修飾,這樣MS分析得到的氨基酸信息跟蛋白質實際的氨基酸信息并不相同。為了使銀染得到的蛋白質可以用于MS分析,為此本公司開發MS兼容型銀染試劑盒,其特點如下:
1. 跟MS兼容,原理是避免使用能化學修飾蛋白質的試劑,所得蛋白質沒有發生化學修飾,故可直接用于后續的MS(包括MALDI-TOF-MS和ESI-MS)分析。
2. 銀染的靈敏度比考馬斯亮藍染色高100倍左右,可達0.2-0.6 ng蛋白質/條帶。
3. 可用于各種PAGE膠,包括變性PAGE膠(如SDS-PAGE,尿素-PAGE),非變性PAGE膠,IEF膠(等電電泳膠),2D膠等。
4. 四種溶液都是現用現配,實驗結果的可重復性好。
使用及效果
將PAGE膠固定后放入溶液A中固定30min后移入水中漂洗3次,每次5min。然后放入B溶液中染色20分鐘,用水快速漂洗2次,再在溶液C中顯色至條帶清晰可辨,取出固定后即可照相。銀染之后可進行后續MS分析。
質譜兼容型蛋白銀染試劑盒細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
質譜兼容型蛋白銀染試劑盒質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
質譜兼容型蛋白銀染試劑盒(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY100215PBS緩沖液(10×)250mLXY100807杜氏PBS溶液,10×100mLXY90306胰酶消化液250mL(A)|250mL(B)XY100301秋水仙素溶液1mLXY130819Bouin固定液2LXY131223Zenker固定液2LXY131224Helly固定液2LXY131225Carnoy固定液2LXY131200細胞計數液(Vi-CELL儀專用)100次XYpyj19細胞培養基1套XYygtz22熒光探針和示蹤劑1瓶XYfly100細胞分離液1瓶XYydyz23細胞凋亡誘導劑和抑制劑1瓶XY100407人淋巴細胞分離液A型100mLXY90307青鏈霉素溶液100mLXY131134Percoll100mLXY131136Ficoll-Paque介質100mLXY100601細胞核微量制備試劑盒50次XY111207動物線粒體純化試劑盒15次(A)|15次(B)XY111208植物線粒體純化試劑盒15次(A)|15次(B)XY120308植物葉綠體純化試劑盒15次XY100410超快轉染試劑盒1mLXY130821阿爾瑪藍細胞增殖與細胞毒檢測試劑100次|500次XY111105MTT檢測試劑盒500次