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水蛭素溶液產(chǎn)品及特點(diǎn)
水蛭素是從水蛭及其唾液腺中提取的含65個(gè)氨基酸殘基的小分子蛋白,水蛭素對(duì)凝血酶有極強(qiáng)的抑制作用,是迄今為止所發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凝血酶天然特異抑制劑。本產(chǎn)品為水蛭素水溶液,濃度為20 000ATU/mL。工作濃度為150-200ATU/mL(活力單位定義:一個(gè)抑制單位ATU(antithrombinunit)指,37℃下,滅活一個(gè)NIH單位凝血酶的量。
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期半年。
水蛭素溶液細(xì)菌的培養(yǎng)和收集:
將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對(duì)數(shù)生長后期。
水蛭素溶液質(zhì)粒DNA少量快速提取:
質(zhì)粒DNA小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡便、快速,能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
水蛭素溶液(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。
8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。
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