一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn)

細(xì)胞質(zhì)是真核細(xì)胞活動(dòng)的重要場所，很多與新陳代謝和信號(hào)傳遞的蛋白質(zhì)都存在于細(xì)胞質(zhì)中，這些蛋白就叫胞漿蛋白。本產(chǎn)品就是專門用于小量真核培養(yǎng)細(xì)胞中制備胞漿蛋白，它具有下列特點(diǎn)：

1. 一步式操作，整個(gè)提取制備過程簡便，只需要半小時(shí)。

2. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，尤其適合同時(shí)處理多個(gè)樣品。

3. 可用于培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞，也可以用于新鮮動(dòng)物組織細(xì)胞。

4. 溫和裂解法，制備的胞漿蛋白能保持天然活性，可以直接用于活性檢測、蛋白濃度測定、各種蛋白質(zhì)電泳等后續(xù)研究。

使用及效果

將培養(yǎng)到55%-65%覆蓋率的體外培養(yǎng)的真核細(xì)胞用胰酶法處理后轉(zhuǎn)移到離心管中，離心30秒，在細(xì)胞沉淀中加入0.5 mL溶液A，懸浮后冰浴10分鐘，振蕩10分鐘，混勻后室溫離心10秒，上清即為細(xì)胞漿提取物，可以直接放-70℃保存或直接

使用。

一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒細(xì)菌的培養(yǎng)和收集：

將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對(duì)數(shù)生長后期。

一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒質(zhì)粒DNA少量快速提取：

質(zhì)粒DNA小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡便、快速，能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。

　　8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。

XY120701鏈脲佐菌素溶液10mLXY60210硫酸鏈霉素溶液10mLXY60209鹽酸四環(huán)素溶液10mLXY120702衣霉素溶液1mLXY60301鹽酸四環(huán)素干粉1gXY120703鹽酸萬古霉素溶液10mL
探針標(biāo)記及檢測
XY90603隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒5次(A)XY90604PCR法DNA探針標(biāo)記試劑盒5次(A)XY90605TdT加尾法DNA探針標(biāo)記試劑盒5次(A)XY131036DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10次XY100210dNTP溶液(標(biāo)記專用)0.5mLXY100920生物素標(biāo)記dUTP溶液50μLXY100921地高辛標(biāo)記dUTP溶液25μLXY120631Aminoally-dUTP溶液100μLXY120630Fluorescein -12- dUTP溶液25μL

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