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NP-40裂解液產(chǎn)品及特點(diǎn)
NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP和co-IP等。本產(chǎn)品裂解能力強(qiáng)度溫和,對(duì)膜蛋白的處理能力一般;對(duì)核蛋白的提取能力較好;對(duì)胞漿蛋白、胞漿磷酸化蛋白和各種轉(zhuǎn)錄因子處理效果很好。本產(chǎn)品含有各種蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制劑,能有效防止各種蛋白酶對(duì)目的蛋白的降解。
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期兩年。
NP-40裂解液細(xì)菌的培養(yǎng)和收集:
將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無(wú)菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。
NP-40裂解液質(zhì)粒DNA少量快速提取:
質(zhì)粒DNA小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速,能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
NP-40裂解液(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無(wú)菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。
8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。
XY100502高效E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒20次XY81024DH5α感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10XY81221HB101感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10XY90207JM109感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10XY90208SURE感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10XY80701TG1感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10XY80806Top10感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10XY90504XL1-Blue感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10XY100818MDS 42rec A trf A菌種1mLXY100819MDS 42T7lac 菌種1mLXY70602DNA快速連接試劑盒30次|100次XY90801一站式TA克隆試劑盒20次(A)|20次(B)XY131126一站式平末端克隆試劑盒20次XY130827小RNA克隆試劑盒10次XY130681通用 miRNA 克隆接頭0.83nmolXY51101常態(tài)轉(zhuǎn)化液20次XY50901菌落PCR試劑盒2.050次XY100884IPTG干粉2.5gXY80909IPTG溶液1.5mLXY100885X-Gal干粉0.5gXY80910X-Gal溶液10mL