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氯霉素溶液,25mg/mL產(chǎn)品及特點
本產(chǎn)品是濃度為25 mg/mL的氯霉素溶液,可以加入到細菌液體或固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)含氯霉素抗性基因的細菌。氯霉素通過與細菌核糖核蛋白體的50S亞基23S rRNA的A2451和A2452位點結(jié)合,抑制peptidyle transferase活性而阻斷蛋白質(zhì)的合成,最后抑制細菌生長。抗性基因c a t 特異性表達氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶( c h l o r a m p h e n i c o lacetyltrasnferase),它通過乙酰化氯霉素而使之不能與核糖體結(jié)合。
低溫運輸,-20℃避光保存,有效期6個月。
氯霉素溶液,25mg/mL細菌的培養(yǎng)和收集:
將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時至對數(shù)生長后期。
氯霉素溶液,25mg/mL質(zhì)粒DNA少量快速提取:
質(zhì)粒DNA小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
氯霉素溶液,25mg/mL(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
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