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干粉型TB培養(yǎng)基產(chǎn)品及特點
TB培養(yǎng)基全名是Terrific Broth,它是由美國科學家Tartof和Hobbs在1987年開發(fā),它不比LB培養(yǎng)基多20%的peptone和380%的yeast extract。含磷酸緩沖液,0.4%glycerol。同樣培養(yǎng)條件下能得到更多菌體,常用于質(zhì)粒制備和蛋白質(zhì)表達。
本產(chǎn)品加水滅菌后即得液體培養(yǎng)基,即可使用。
常溫運輸及保存、有效期兩年。
T a r t o f , K . D . , a n d C . A . H o b b s ,"Improved Media for Growing Plasmidand Cosmid Clones," Bethesda Res.Lab. Focus Vol. 9 No. 2, pp. 12 (1987).
干粉型TB培養(yǎng)基細菌的培養(yǎng)和收集:
將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時至對數(shù)生長后期。
干粉型TB培養(yǎng)基質(zhì)粒DNA少量快速提取:
質(zhì)粒DNA小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
干粉型TB培養(yǎng)基(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
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