 |
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||
| [發表評論] [本類其他產品] [本類其他供應商] [收藏] | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 銷售商： 上海信裕生物工程有限公司 | 查看該公司所有產品 >> |
通用 miRNA 克隆接頭產品及特點
5 端腺苷化，3 端封閉的寡核糖核苷酸可用于Bartel 方法中短片段 RNA 分子的克隆 (1) 。RNA 連接酶可以識別“活化”的腺苷化寡核糖核苷酸，無需 ATP，即可將其 5 端與第二條單鏈 RNA 的 3 端 OH 共價連接。利用此 5 端腺苷化，3 端封閉的寡核糖核苷酸，加入 T4 RNA 連接酶 2，截短型、T4 RNA 連接酶 2，截短型K227Q 或 T4 RNA 連接酶 1 (有/無 ATP) ，只能與核酸混合物中的目的寡核苷酸連接。本產品可以用于小RNA克隆、miRNA文庫構建。本產品原理如下：腺苷化的 oligo 序列：
5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT-NH2 3´。
建議工作濃度：100μM
參考文獻
(1) Lau et al. (2001) Science , 294, 858–856.
(2) Pfeffer, S., Lagos-Quintana, M. and Tuschl, T. (2005). Current Protocolsin Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (26.4.14).
通用 miRNA 克隆接頭細菌的培養和收集：
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
通用 miRNA 克隆接頭質粒DNA少量快速提�。�
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
通用 miRNA 克隆接頭（一）、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。
2、棄上清，將管倒置于衛生紙上幾分鐘，使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY130987接頭DNA5nmol(A)|5nmol(B)|5nmol(C)|5nmol(D)|5nmol(E)XY130988EcoR I-Not I-BamH I接頭1nmolXY130204Oligo快速復性液，10×1mLXY100103裂殖酵母化學感受態細胞制備試劑盒20次(A)|20次(B)XY81109酵母化學感受態細胞制備試劑盒20次(A)|20次(B)XY81201酵母電轉感受態細胞制備試劑盒20次XY100502高效E.coli感受態細胞制備試劑盒20次XY81024DH5α感受態細胞0.1mL×10XY81221HB101感受態細胞0.1mL×10XY90207JM109感受態細胞0.1mL×10XY90208SURE感受態細胞0.1mL×10XY80701TG1感受態細胞0.1mL×10XY80806Top10感受態細胞0.1mL×10XY90504XL1-Blue感受態細胞0.1mL×10XY100818MDS 42rec A trf A菌種1mLXY100819MDS 42T7lac 菌種1mLXY70602DNA快速連接試劑盒30次|100次XY90801一站式TA克隆試劑盒20次(A)|20次(B)XY131126一站式平末端克隆試劑盒20次XY130827小RNA克隆試劑盒10次XY130681通用 miRNA 克隆接頭0.83nmolXY51101常態轉化液20次XY50901菌落PCR試劑盒2.050次XY100884IPTG干粉2.5gXY80909IPTG溶液1.5mLXY100885X-Gal干粉0.5g
