克必隆平末端克隆試劑盒產品及特點

本產品是一種先進的**基因陽性選擇克隆系統，可以高效克隆平末端 PCR 產物和任何具有平末端的DNA 片段。試劑盒提供一個新穎的**基因陽性選擇克隆載體克必隆B載體（組成型）。其工作原理如下：

本產品具有下列特點：

1. 采用**基因原理，無需藍白斑篩選，零背景。

2. 該試劑盒對磷酸化或非磷酸化的 DNA 片段都有效。

3. 陽性選擇載體和插入片段連接僅需5分鐘即可獲得超過95%的陽性重組克隆。

4. 由具有校正活性的聚合酶(如：Pfu DNA聚合酶，KOD DNA聚合酶)擴增的平末端 PCR 產物可直接連入克隆載體。

5. 連接產物可直接轉化常用的大腸桿菌菌株。

6. 為方便酶切作圖和插入片段基因操作，本克隆載體的多克隆位點兩側各包含一個BglII識別序列。此外，該載體含有T7啟動子，可用于體內或體外轉錄、插入片段測序等研究。

使用及效果

詳細使用步驟請參見產品使用手冊。

克必隆平末端克隆試劑盒細菌的培養和收集：

將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。

克必隆平末端克隆試劑盒質粒DNA少量快速提取：

質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　克必隆平末端克隆試劑盒（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。

　　8、取20ml進行電泳檢查。

XY130551單細胞RNA擴增試劑盒80次XY130803單細胞裂解液(DNA)1mLXY130804單細胞裂解液(RNA)1mLXY130805單細胞懸浮液1mLXY130806胚胎裂解液1mLXY131128動物種屬鑒定PCR Mix100次XY131129植物種屬鑒定PCR Mix100次XY131130真菌種屬鑒定PCR Mix100次XY131131細菌種屬鑒定PCR Mix100次XY30常用PCR引物100uL
基因結構和功能
XY100212    一管式點突變試劑盒    10次
XY130823    多點突變試劑盒    20次
XY100213    DNA嵌套缺失試劑盒    10次
XY100922    亞硫酸氫鹽DNA修飾試劑盒    50次
XY130301    DNA甲基化修飾試劑盒    150次
XY130428    甲基化PCR 2.0試劑盒    150次
XY100923    甲基化專一性PCR試劑盒    50次
XY100936    人甲基化/非甲基化DNA標準品    100次
XY111009    端粒酶重復片段擴增試劑盒    50次

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