DNA快速連接試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn)

DNA連接反應(yīng)通過(guò)T4連接酶催化雙鏈DNA的3-OH和5-P形成磷酸二酯鍵而將DNA共價(jià)連接在一起。被連接的DNA末端可以是粘末端（例如限制性切割EcoR I產(chǎn)生的末端），也可以是平末端（限制性切割Sma I產(chǎn)生的末端）。Pheiffer 等人發(fā)現(xiàn)PEG可以促進(jìn)T4 DNA連接酶催化的連接反應(yīng)[NAR ，11，7853-7871，1983]，連接反應(yīng)只需十分鐘即可完成。本產(chǎn)品就是根據(jù)這一原理設(shè)計(jì)，其特點(diǎn)如下：

1. 超快，整個(gè)連接反應(yīng)只需要室溫5分鐘左右，反應(yīng)液可以直接用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。

2. 高效，溶液配方經(jīng)過(guò)優(yōu)化，每μg插入DNA連接轉(zhuǎn)化得到的重組子可達(dá)107左右。

3. 既可用于平末端連接，也可用于粘末端連接，包括PCR產(chǎn)物與T載體的連接。

4. 簡(jiǎn)單，客戶只需要提供載體和插入片段即可。

使用及效果

在離心管中分別加入要克隆的DNA與載體DNA（其摩爾比最好在3-10之間），共4 μL，加入5 μL溶液A和1 μL溶液B，混勻后室溫放置10分鐘后即可直接轉(zhuǎn)化。

DNA快速連接試劑盒細(xì)菌的培養(yǎng)和收集：

將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無(wú)菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。

DNA快速連接試劑盒質(zhì)粒DNA少量快速提取：

質(zhì)粒DNA小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　DNA快速連接試劑盒（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無(wú)菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。

　　8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。

XY120615dATP溶液，100mM0.5mLXY120617dTTP溶液，100mM0.5mLXY120619dGTP溶液，100mM0.5mLXY130917dCTP溶液，100mM0.5mLXY131139Deaza dGTP溶液，5mM0.4mLXY131140雙脫氧dNTP溶液，10mM40uL×4XY131141dNTP和引物清除劑100次XY131212PCR Mix染料10mLXY60901可逆型Taq DNA聚合酶抑制劑0.3mLXY130815Taq酶抗體250U|1000UXY130601DNA 修復(fù)混合液30次|150次XY70802即用型PCR試劑盒2.0100次|600次XY90805即用型PCR試劑盒3.0100次|600次XY130986即用型熱啟動(dòng)PCR 試劑盒1.5次XY130985免DNA提取PCR試劑盒100次XY101005即用型易錯(cuò)PCR試劑盒100次XY90702即用型長(zhǎng)片段PCR試劑盒20次XY90708即用型高保真PCR試劑盒1.5mL|9mLXY130605即用型多重 PCR試劑盒50次XY90408即用型熒光定量PCR試劑盒100次|600次XY130816Real-Time PCR稀釋液1mlXY130817ROX參考染料，高濃度型200μlXY100931ROX參考染料，低濃度型5μg

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