WB600枯草宿主菌菌種產(chǎn)品及特點

WB600菌株是來源于BS168的變異，是蛋白酶缺陷型菌株，敲除了6個蛋白酶基因。含紅霉素抗性基因。轉(zhuǎn)化方法簡單、便捷，金黃色葡萄球菌帶有抗性基因的質(zhì)粒可作為其載體，菌株沒有致病性。細胞壁的組成簡單，只含有肽聚糖和磷璧質(zhì)，因此在分泌的蛋白質(zhì)產(chǎn)品中不會混雜有胞被內(nèi)毒素（熱源性脂多糖）。蛋白純化簡單，多用于蛋白表達。

其基因型如下：

Erm

低溫運輸，-80℃保存，有效期一年。

WB600枯草宿主菌菌種細菌的培養(yǎng)和收集：

將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時至對數(shù)生長后期。

WB600枯草宿主菌菌種質(zhì)粒DNA少量快速提取：

質(zhì)粒DNA小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　WB600枯草宿主菌菌種（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。

　　8、取20ml進行電泳檢查。

XY100802    重蒸酚    100mL
XY3190    水飽和酚    100mL
XY3191    Tris飽和酚    100mL
XY100803    酸酚    100mL
XY100804    氯仿-異戊醇混合液    100mL
XY100805    酚-氯仿-異戊醇混合液    100mL
XY100935    超純水    100mL
XY60604    DEPC水    100mL
XY80403    RNase-free水    10mL
XY71207    RNA洗脫液    50mL
蛋白質(zhì)研究
XY80807動物細胞裂解液50mL(A)|50mL(B)XY131006RIPA裂解液(強)100mLXY131007RIPA裂解液(中)100mLXY131008RIPA裂解液(弱)100mLXY131009NP-40裂解液100mLXY90707動植物總蛋白微量提取試劑盒50次XY91204動植物膜蛋白微量制備試劑盒50次XY90613動物細胞核蛋白微量制備試劑盒25次|100次XY91203一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒30次|100次XY121208液體樣品蛋白純化回收試劑盒50次XY81218植物總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒(SDS-PAGE)30次

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