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XL1-Blue菌種產(chǎn)品及特點
XL1-Blue菌株是核酸內(nèi)切酶缺陷型(endA)宿主菌,能夠有效提升小提質(zhì)粒DNA的質(zhì)量。XL1-Blue是重組缺陷型宿主菌(rec A),能夠有效提升插入片段的穩(wěn)定性。細(xì)胞內(nèi)的hsdR基因突變,能夠阻止克隆的DNA被Eco K核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)的酶切。XL1-Blue菌株中的F’附加體上面的lacIqZΔM15基因使得該宿主菌能夠應(yīng)用藍(lán)白斑篩選進(jìn)行克隆質(zhì)粒的鑒定。XL1-Blue是使用質(zhì)粒或Lambda載體進(jìn)行常規(guī)克隆的優(yōu)良的克隆菌株。
其基因型如下:
recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17supE44 relA1 lac [F' pro AB lac IqZΔM15 Tn10 (Tetr)]
低溫運輸,-80℃保存,有效期一年。
XL1-Blue菌種細(xì)菌的培養(yǎng)和收集:
將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時至對數(shù)生長后期。
XL1-Blue菌種質(zhì)粒DNA少量快速提取:
質(zhì)粒DNA小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
XL1-Blue菌種(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。
8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。
XY2001 長片段PCR擴(kuò)增試劑盒 100次/500次
XY2101 高保真PCR擴(kuò)增試劑盒 100次/500次
XY0101 pSURE-T 載體連接試劑盒 20次/60次/20次(帶T4ligase)/60次(帶T4ligase)
XY0201 pSURE -T Simple 載體連接試劑盒 20次/60次/20次(帶T4ligase)/60次(帶T4ligase)
XY0301 pGEMX -T Easy 載體連接試劑盒 20次/60次/20次(帶T4ligase)/60次(帶T4ligase)
XY0401 pBLUE-T 載體連接試劑盒 20次/60次/20次(帶T4ligase)/60次(帶T4ligase)
XY0501 通用T載體菌落PCR鑒定試劑盒 80次-100次/400次-500次
XY0601 平末端DNA加A試劑盒 25次/50次
XY0801 高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒 100×100μl/200×100μl/400×100μl
XY0101 BCA蛋白定量試劑盒 200次/500次/2500次/5000次
XY0201 Bradford法蛋白定量試劑盒 250次/1000次/2500次