Origami B菌種產品及特點

Origami B菌株是集合BL21，Tuner和Origami三種細胞株的優點于一身。Origami B系列菌株同樣具有Origami系列菌株含有的trxB/gor基因突變；該菌株還來源于BL21的lacZY基因突變株。T h i o r e d o x i n r e d u c t a s e ( t r x B ) 和glutathione reductase (gor)基因上同時含有突變，這使得該菌株能夠更加高效的在細胞質內生成二硫鍵，有助于含二硫鍵蛋白的活性蛋白形成。TrxB和Gor基因突變使得質粒能夠分別具有卡那和四環素抗性，所以本菌株無法用于卡那和四環素抗性質粒的蛋白表達。Origami B菌株IPTG誘導表達。

其基因型如下：

F– ompT hsdS B(rB–mB–) gal dcm lac Y1aphC gor522 ::Tn10 trxB (KanR,TetR)

低溫運輸，-80℃保存，有效期一年。

Origami B菌種細菌的培養和收集：

將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。

Origami B菌種質粒DNA少量快速提取：

質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　Origami B菌種（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。

　　8、取20ml進行電泳檢查。

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