M15菌種產品及特點
本產品為E. coli M15菌株,來源于K12品系。細胞含有包含反式lac 抑制子的pREP4質粒,保證高度調控的表達。菌株攜帶有阻抑質粒pREP4,該質粒高水平的表達lac抑制子,在IPTG誘導前反式抑制蛋白表達。通過卡那霉素抗性篩選可以保持pREP4質粒在菌株中的穩定性。M15菌株具有卡那霉素抗性。
其基因型如下:
F- NalS StrS RifS thi - lac - ara - g al+ mtl -rec A+ uvr + lon + (pRE4 KanR)
低溫運輸,-80℃保存,有效期一年。
M15菌種細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
M15菌種質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
M15菌種(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
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