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C41(DE3)菌種產品及特點
C41(DE3)菌株能夠有效表達來源于各物種包括細菌,酵母,植物,病毒和動物等多個物種的有毒蛋白。C41(DE3)來源于BL21(DE3)。該宿主菌含有一個基因突變,能夠降低T7 RNAP的酶活力,所以能夠阻止過表達重組表達有毒蛋白的細胞死亡。C41(DE3)是λDE3的溶源性菌株,在lacUV5啟動子的下游含有一個T7 RNA聚合酶基因,適合表達克隆于T7啟動子表達載體上的基因。
其基因型如下:
F- omp T hsd SB(rB-mB-) gal dcm (DE3)
低溫運輸,-80℃保存,有效期一年。
C41(DE3)菌種細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
C41(DE3)菌種質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
C41(DE3)菌種(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY130609一步式RT-PCR Mix1mLXY130957免RNA提取RT-PCR試劑盒100次XY101219即用型熒光定量RT-PCR試劑盒50次XY100941通用型全基因組擴增試劑盒30次XY100938單細胞全基因組擴增試劑盒30次XY100940石蠟包埋組織全基因組擴增試劑盒30次XY100942單孢子全基因組擴增試劑盒30次XY100947環狀DNA全基因組擴增試劑盒30次XY100203通用型LAMP試劑盒50次XY101114通用型RT-LAMP試劑盒50次XY130923LAMP擴增陽性對照50次XY130833LAMP可見光染料1mLXY131179核酸稀釋液,測OD專用100mLXY131083Ribo-SPIA cDNA 擴增試劑盒20次XY91106T7體外轉錄試劑盒50次(A)|50次(B)XY91107SP6體外轉錄試劑盒50次(A)|50次(B)XY91108T3體外轉錄試劑盒50次(A)|50次(B)XY130694m7G(5′)ppp(5′)G 帽結構類似物25OD