K562-Wnt5a人轉基因細胞在進行細胞傳代培養的時候，胰蛋白酶作用的時間是在1～3分鐘，由于我有好幾個培養瓶（4個以上）的細胞都需要進行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個培養瓶一個培養瓶這么分開做，還是可以幾個同時做呢？同時做我怕后來操作的培養瓶中的細胞消化過度啊！一個一個的做會不會又太費時呢？

培養基 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
生長特性 懸浮生長

1、一個一個做！防止污染，和消化細胞時間的不均勻。

2、原則上，為了避免細胞系之間的污染，應該一個一個的做。但是如果你能保證無菌操作的原則，K562-Wnt5a人轉基因細胞也能把握好各種貼壁細胞系消化的時間，是可以同時做，這樣效率高。建議你剛開始一個一個的做，熟練以后根據具體情況決定如何做。

3、4個可以同時做，時間到了用移液槍給4個瓶加含血清的培養基終止就行。

4、新手的話強烈建議一個一個處理細胞，特別是消化，除非你養的細胞對消化都不敏感，不然很容易消化過度或者不到位。另外同時處理多個細胞容易出現細胞間交叉污染，一旦污染基本沒救，比細菌污染還要麻煩。

5、剛開始還是一個一個來，K562-Wnt5a人轉基因細胞消化的時間與細胞的來源有很大關系，貼壁性強的細胞，需要消化的時間較長。一般除了貼壁性強的癌細胞外，細胞消化時間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關系，濃度高的消化時間要短一些，不然會消化過了，對于細胞的生長不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時，輕晃培養瓶，在顯微鏡下看見細胞開始變亮，皺縮，卷邊的時候就加入培養液或者血清終止消化。

失敗的關鍵原因還是細胞復蘇的時候沒有迅速解凍的緣故，最后一次成功是因為注意到這個問題。細胞的復蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果K562-Wnt5a人轉基因細胞取出后沒有在盡可能短的時間里解凍的話細胞內部會產生很多冰晶對細胞就有致命的損失了。另外，細胞的確應該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細胞，放-80度保存恐怕不到三個月就不行了，并且狀態會很差。PH-pc-h028    肺泡上皮細胞    Alveolar epithelial cells    形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h029    氣管上皮細胞    Tracheal epithelial cells    形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h030    支氣管上皮細胞    Bronchial Epithelial Cells    形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h031    小氣道上皮細胞    Airwayepithelial cells    形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h032    肺纖維原細胞    Pulmonary fibroblastscells    形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h033    支氣管平滑肌細胞    Bronchialsmooth muscle    形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h034    小氣道平滑肌細胞    Airwaysmooth muscle cells    形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 

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