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| 銷售商： 上海信裕生物工程有限公司 | 查看該公司所有產品 >> |
SP6體外轉錄試劑盒產品及特點
本試劑盒是基于沙門氏菌噬菌體SP6 RNA聚合酶的RNA體外轉錄試劑盒，它利用含有SP6啟動子的模版DNA，以NTP為底物，從SP6啟動子下游開始合成與模版DNA中一條鏈互補的RNA，簡單快速獲得大量的RNA分子。本產品具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需提供含SP6啟動子的DNA模板即可以進行體外轉錄實驗，不需要單獨準備每一個成份。
2. 單溶液預配液，減少加樣次數，避免了操作誤差，增加了可重復性。
3. 模版DNA可以是線性化的質粒DNA，也可以是PCR擴增產物。
4. 可以合成的RNA的最佳長度在20 nt到5000 nt之間。
5. 產品配方經過精心優化，每 gμDNA模版可以合成2-6 μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA 結構研究、核酶生物化學、體外翻譯、RNA-蛋白質相互作用、反義技術、SELEX 技術和 RNA 干擾（RNAi）等實驗。
使用及效果
將2×轉錄預配液10 μL與用戶自備的DNA模板和1 μL SP6 RNA聚合酶混合，補水到20 μL，混合后37℃ 保溫1到2小時即可。
SP6體外轉錄試劑盒產品及特點
由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是臨床分子生物學研究中的一個棘手的問題。為解決此問題，本公司在非凍型組織RNA保存液的基礎上，開發了本產品，它具有下列特點:
1. 能快速滲透到新鮮血液細胞內，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常溫可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3個月。
2. 操作簡單，直接將本產品和新鮮血液細胞沉淀按比例混合即可。
3. 適用于人新鮮血和哺乳動物新鮮血液，不適用于陳舊血液和凍凝血液，也不適用于禽類血液和其他動物血液。
4. 重復性好，效果跟進口同類產品相當。
5. 保存的樣品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。
SP6體外轉錄試劑盒使用及效果
將本產品與新鮮血液樣品按4:1的比例（4份本產品加1份新鮮血液）混合后即可放置。放置結束后將樣品轉移到離心管中，5000 g室溫離心1分鐘，小心吸出淺粉紅色的上清液，棕紅色沉淀（血細胞和蛋白沉淀）直接用于后續的總RNA提取。
1. 新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。
2. 新鮮組織：某些富含內源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。SP6體外轉錄試劑盒更可靠的方法是：在液氮條件下將組織研碎，并且勻漿時使用更多裂解液。
3. 冷凍樣品：樣品取材后應立即置于液氮中速凍，然后移至-70℃冰箱保存。樣品決不能未經液氮速凍而直接保存于-70℃冰箱中。冷凍樣品，即使是冷凍細胞，如果不在液氮條件下研磨碎，而直接加入裂解液中勻漿，RNA也比新鮮樣品更容易降解。樣品在與裂解液充分接觸前決不能出現融化，所以研磨用具必須預冷，在碾磨過程中要及時補充液氮。樣品研碎后，在液氮剛剛揮發完時，將樣品迅速轉移到含裂解液的容器中，立即混勻勻漿。
4. 外源RNA酶的污染：試劑，器械及實驗環境中的RNA酶進入實驗系統,可考慮華越洋產品：外源RNA酶清除劑（RNase remover)解決。
5. 內源RNA酶的污染：抑制劑失效或者用量不夠，實驗樣品過多；勻漿時溫度過高。
SP6體外轉錄試劑盒RNA提取得率低
1. 該組織或者細胞中RNA含量偏低：不同細胞和組織中RNA的豐度不同，如肝臟，胰腺，心臟等是高豐度組織(總RNA含量2-4μg/mg)，腦，胚胎，腎臟，肺，胸腺，卵巢等是中豐度組織(總RNA含量0.05-2μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低豐度組織(總RNA含量<0.05μg/mg)。
2. 組織起始量太少或者太多：樣品量過少，則細胞組織中RNA含量較低；樣品量過多則可能超過裂解液的裂解能力，裂解將不完全，從而導致RNA得率低。
