T7體外轉錄試劑盒產品及特點
本試劑盒是基于T7 RNA聚合酶的RNA體外轉錄試劑盒,它利用含有T7啟動子的模版DNA,以NTP為底物,從T7啟動子下游開始合成與模版DNA中一條鏈互補的RNA,簡單快速獲得大量的RNA分子。本產品具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需提供含T7啟動子的DNA模板即可以進行體外轉錄實驗,不需要單獨準備每一個成份。
2. 單溶液預配液,減少加樣次數,避免了操作誤差,增加了可重復性。
3. 模版DNA可以是線性化的質粒DNA,也可以是PCR擴增產物。
4. 可以合成的RNA的最佳長度在20 nt到2000 nt之間。
5. 產品配方經過精心優化,每 μg DNA模版可以合成2-6 μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA 結構研究、核酶生物化學、體外翻譯、RNA-蛋白質相互作用、反義技術、SELEX 技術和 RNA 干擾(RNAi)等實驗。
使用及效果
將2×轉錄預配液10 μL與用戶自備的DNA模板和1 μL T7 RNA聚合酶混合,補水到20 μL,混合后37℃ 保溫1到2小時即可。
T7體外轉錄試劑盒產品及特點
由于血液富含RNase,因此血液RNA非常容易降解,是臨床分子生物學研究中的一個棘手的問題。為解決此問題,本公司在非凍型組織RNA保存液的基礎上,開發了本產品,它具有下列特點:
1. 能快速滲透到新鮮血液細胞內,抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常溫可放置3天,4℃可放置5天,-20℃可放置3個月。
2. 操作簡單,直接將本產品和新鮮血液細胞沉淀按比例混合即可。
3. 適用于人新鮮血和哺乳動物新鮮血液,不適用于陳舊血液和凍凝血液,也不適用于禽類血液和其他動物血液。
4. 重復性好,效果跟進口同類產品相當。
5. 保存的樣品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。
T7體外轉錄試劑盒使用及效果
將本產品與新鮮血液樣品按4:1的比例(4份本產品加1份新鮮血液)混合后即可放置。放置結束后將樣品轉移到離心管中,5000 g室溫離心1分鐘,小心吸出淺粉紅色的上清液,棕紅色沉淀(血細胞和蛋白沉淀)直接用于后續的總RNA提取。
1. 新鮮細胞:如果試劑沒有問題,且外源性污染也可以排除,那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如果將裂解液直接加入培養皿中裂解細胞,一定要使裂解液能覆蓋住細胞。
2. 新鮮組織:某些富含內源核酸酶的樣品(如肝臟,胸腺等),即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。T7體外轉錄試劑盒更可靠的方法是:在液氮條件下將組織研碎,并且勻漿時使用更多裂解液。
3. 冷凍樣品:樣品取材后應立即置于液氮中速凍,然后移至-70℃冰箱保存。樣品決不能未經液氮速凍而直接保存于-70℃冰箱中。冷凍樣品,即使是冷凍細胞,如果不在液氮條件下研磨碎,而直接加入裂解液中勻漿,RNA也比新鮮樣品更容易降解。樣品在與裂解液充分接觸前決不能出現融化,所以研磨用具必須預冷,在碾磨過程中要及時補充液氮。樣品研碎后,在液氮剛剛揮發完時,將樣品迅速轉移到含裂解液的容器中,立即混勻勻漿。
4. 外源RNA酶的污染:試劑,器械及實驗環境中的RNA酶進入實驗系統,可考慮華越洋產品:外源RNA酶清除劑(RNase remover)解決。
5. 內源RNA酶的污染:抑制劑失效或者用量不夠,實驗樣品過多;勻漿時溫度過高。
T7體外轉錄試劑盒RNA提取得率低
1. 該組織或者細胞中RNA含量偏低:不同細胞和組織中RNA的豐度不同,如肝臟,胰腺,心臟等是高豐度組織(總RNA含量2-4μg/mg),腦,胚胎,腎臟,肺,胸腺,卵巢等是中豐度組織(總RNA含量0.05-2μg/mg),膀胱,骨,脂肪等是低豐度組織(總RNA含量<0.05μg/mg)。
2. 組織起始量太少或者太多:樣品量過少,則細胞組織中RNA含量較低;樣品量過多則可能超過裂解液的裂解能力,裂解將不完全,從而導致RNA得率低。
XY91203一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒30次|100次XY121208液體樣品蛋白純化回收試劑盒50次XY81218植物總蛋白質微量提取試劑盒(SDS-PAGE)30次XY81219植物總蛋白質微量提取試劑(2DE)30次|100次XY81202真菌總蛋白質微量提取試劑盒50次XY90902細菌總蛋白質微量提取試劑盒30次XY100929細菌膜蛋白質微量提取試劑盒50次XY131064細胞表面蛋白分離試劑盒8次XY131066磷酸化蛋白富集試劑盒10次XY131067ConA 糖蛋白分離試劑盒10次XY131205WGA 糖蛋白分離試劑盒10次XY90508包涵體微量純化試劑盒20次XY90509包涵體中量純化試劑盒5次XY90510包涵體大量純化試劑盒2次XY131121蛋白折疊試劑盒100次XY100302包涵體蛋白溶解及復性套裝100次XY100102一站式His標記蛋白質微量純化套裝20次(A)|20次(B)XY100101鎳柱介質2mL|10mLXY131057鈷柱介質10mLXY120801鎳柱原位再生試劑盒20次XY100202兔抗His標簽多抗,HRP標記100μLXY111116一站式GST標記蛋白質微量純化套裝20次(A)|20次(B)XY120101谷胱甘肽瓊脂糖2mLXY120705L-谷胱甘肽(還原型)5gXY120534兔抗GST標簽多抗20μL