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當(dāng)BEL-7404人肝癌細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時，可以凍存細(xì)胞，在超凈臺中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm離心5min，棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為4-6×106/ml，將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
含量：>1x106 個/mL， 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
培養(yǎng)基：RPMI-1640(GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。
生長特性：貼壁生長
污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
BEL-7404人肝癌細(xì)胞傳代操作步驟：
一、貼壁細(xì)胞傳代
1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)。
2.吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞。
3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用。
4.BEL-7404人肝癌細(xì)胞用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡。
5.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細(xì)胞傳代
1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min。
2.棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液。
3.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
BEL-7404人肝癌細(xì)胞 培養(yǎng)的過程中，經(jīng)常見到黑色的顆粒或小黑點(diǎn)，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？原因：
黑點(diǎn)，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基
1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢，那么就有可能是污染了，需要處理；
2、如果小黑點(diǎn)沒有增殖趨勢，且不影響細(xì)胞生長，也不影響實驗的話，則可能
a、是“黑膠蟲”，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠BEL-7404人肝癌細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細(xì)胞競爭性生長，開始時對細(xì)胞并沒有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候， 細(xì)胞生長就會受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動的開展和進(jìn)行。以前（這個至少是10年以前），很多實驗室在養(yǎng)細(xì)胞時用國產(chǎn)血清，那時的血清可能質(zhì)量不過關(guān)，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。
b、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運(yùn)動。
c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)PH-pc-h140 神經(jīng)少突起前質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞 Neural glial cell precursorssmall protrusions 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
PH-pc-h141 神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞 Neural astrocytes cells 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
PH-pc-h142 神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞 Neural microglia cells 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
PH-pc-h143 腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 Brain microvascular endothelialcells 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
PH-pc-h144 腦成纖維細(xì)胞 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
PH-pc-h145 小腦顆粒細(xì)胞 Cerebellar granule cells 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
PH-pc-h146 眼角膜上皮細(xì)胞 Corneal epithelial cells 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
PH-pc-h147 視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 Retinal microvascularendothelial cells 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
PH-pc-h148 角膜成纖維細(xì)胞 Corneal fibroblasts 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
