 |
|
|||||||||||||||||||||||||||||
| [發表評論] [本類其他產品] [本類其他供應商] [收藏] | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 銷售商： 上海澤葉生物科技有限公司 | 查看該公司所有產品 >> |
當BT-474 人乳腺導管癌細胞密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時，可以凍存細胞，在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管，1000rpm離心5min，棄上清，用90%培養液+10%DMSO的混合液重懸細胞，并調整細胞密度為4-6×106/ml，將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
含量：>1x106 個/mL， 規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
培養基：RPMI-1640(GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L), 90%; FBS 10%
生長特性：貼壁生長
污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
BT-474 人乳腺導管癌細胞傳代操作步驟：
一、貼壁細胞傳代
1.提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內。
2.吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞。
3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用。
4.BT-474 人乳腺導管癌細胞用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡。
5.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細胞傳代
1.將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min。
2.棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液。
3.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。
BT-474 人乳腺導管癌細胞 培養的過程中，經常見到黑色的顆粒或小黑點，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？原因：
黑點，大概有細胞本身帶的，環境有的，還有人身上帶進細胞間的,還有就是血清和培養基
1、如果小黑點有增殖趨勢，那么就有可能是污染了，需要處理；
2、如果小黑點沒有增殖趨勢，且不影響細胞生長，也不影響實驗的話，則可能
a、是“黑膠蟲”，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。有人認為是從血清中來的一種原蟲，也有人認為是細菌，或是真菌，也有人認為是血清中的蛋白的結晶。“黑膠蟲”可寄生于動物細胞，也可以生存于培養基中，依靠BT-474 人乳腺導管癌細胞和培養基中的營養為生，并隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長，開始時對細胞并沒有什么影響，但當黑膠蟲的數量多到一定程度的時候， 細胞生長就會受到影響直至死亡，嚴重影響了科研活動的開展和進行。以前（這個至少是10年以前），很多實驗室在養細胞時用國產血清，那時的血清可能質量不過關，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒有明確的鑒定。但是現在的血清，即使國產的，產品里這種現象就少見了。
b、是細胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運動。
c、是核糖體，也可能是雜質ZYC3464 人表皮黑色素細胞--深色素 HEM-d 形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3465 人黑色素細胞--成人 HM 形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3466 人黑色素細胞--胎兒 HEM-f 形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3467 人真皮成纖維細胞--胎兒 HDF-f 形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3468 人真皮成纖維細胞--新生 HDF-n 形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3469 人真皮成纖維細胞--成人 HDF-a 形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3470 人真皮成纖維細胞-胎兒絲裂霉素C處理 HDF-f-mt 形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3471 人真皮成纖維細胞-胎兒絲裂霉素C處理 HDF-f-mt 形態：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養條件：MEM/F12 +10% FBS
