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當(dāng)Calu-6人退行性癌細胞密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時，可以凍存細胞，在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管，1000rpm離心5min，棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細胞，并調(diào)整細胞密度為4-6×106/ml，將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
含量：>1x106 個/mL， 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
培養(yǎng)基：MEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號41500034，添加NaHCO3 1.5g/L，Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。
生長特性：貼壁生長
污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
Calu-6人退行性癌細胞傳代操作步驟：
一、貼壁細胞傳代
1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)。
2.吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞。
3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用。
4.Calu-6人退行性癌細胞用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液�？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡。
5.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細胞傳代
1.將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min。
2.棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液。
3.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
Calu-6人退行性癌細胞 培養(yǎng)的過程中，經(jīng)常見到黑色的顆�；蛐『邳c，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？原因：
黑點，大概有細胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進細胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基
1、如果小黑點有增殖趨勢，那么就有可能是污染了，需要處理；
2、如果小黑點沒有增殖趨勢，且不影響細胞生長，也不影響實驗的話，則可能
a、是“黑膠蟲”，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。有人認為是從血清中來的一種原蟲，也有人認為是細菌，或是真菌，也有人認為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動物細胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠Calu-6人退行性癌細胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細胞競爭性生長，開始時對細胞并沒有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候， 細胞生長就會受到影響直至死亡，嚴重影響了科研活動的開展和進行。以前（這個至少是10年以前），很多實驗室在養(yǎng)細胞時用國產(chǎn)血清，那時的血清可能質(zhì)量不過關(guān)，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。
b、是細胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運動。
c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)
ZYC3454 真皮細胞系統(tǒng) 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3455 人真皮微血管內(nèi)皮細胞 HDMEC 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3456 人真皮淋巴管內(nèi)皮細胞 HDLEC 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3457 人真皮微血管內(nèi)皮細胞-成人 HDMEC-a 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3458 "人真皮血管平滑肌細胞-新生兒
" HDVSMC 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3459 人表皮角質(zhì)細胞--新生 HEK-n 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3460 人表皮角質(zhì)細胞--成人 HEK-a 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3461 人表皮角質(zhì)細胞--胎兒 HKf 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3462 人表皮黑色素細胞--淺色素 HEM-l 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
ZYC3463 人表皮黑色素細胞--中色素 HEM-m 形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣 培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS
