當(dāng)PC-12大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí)，可以凍存細(xì)胞，在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm離心5min，棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為4-6×106/ml，將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL，  規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

培養(yǎng)基：大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 完全培養(yǎng)液（100 ml）： RPMI Medium 1640 (Invitrogen, 11875-093) 85 ml FBS (Gibco) 5 ml heat-inactivated horse serum (GIBCO, 16050) 10 

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

PC-12大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞傳代操作步驟：

一、貼壁細(xì)胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)。

2.吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞。

3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用。

4.PC-12大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液�？刂拼荡虻牧Χ龋�避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

二、懸浮細(xì)胞傳代

1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min。

2.棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液。

3.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

PC-12大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 培養(yǎng)的過(guò)程中，經(jīng)常見(jiàn)到黑色的顆粒或小黑點(diǎn)，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？原因：

黑點(diǎn)，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢(shì)，那么就有可能是污染了，需要處理；

2、如果小黑點(diǎn)沒(méi)有增殖趨勢(shì)，且不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，也不影響實(shí)驗(yàn)的話，則可能

 a、是“黑膠蟲”，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭(zhēng)議。有人認(rèn)為是從血清中來(lái)的一種原蟲，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動(dòng)物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠PC-12大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，開(kāi)始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒(méi)有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候， 細(xì)胞生長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開(kāi)展和進(jìn)行。以前（這個(gè)至少是10年以前），很多實(shí)驗(yàn)室在養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用國(guó)產(chǎn)血清，那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過(guò)關(guān)，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒(méi)有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國(guó)產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見(jiàn)了。

 b、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運(yùn)動(dòng)。

 c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)YB80903    大提柱式植物RNAOUT    5次
YB120503    柱式藻類RNAOUT    50次
YB90704    土壤RNAOUT    50次
YB90705    柱式土壤RNAOUT    50次
YB60305    真菌RNAOUT    50次|250次
YB80804    柱式真菌RNAOUT    50次
YB80904    大提柱式真菌RNAOUT    5次
YB51102    細(xì)菌RNAOUT    100次|250次
YB80103    柱式細(xì)菌RNAOUT    50次
YB80905    大提柱式細(xì)菌RNAOUT    5次
YB3073    一管式病毒RNAOUT    50次|200次
YB71001    柱式病毒RNAOUT    50次
YB80922    96孔板病毒RNAOUT(離心法)    1次|5次
YB80104    一站式柱式miRNAOUT    50次
YB80906    一站式大提柱式miRNAOUT    5次
YB80908    一站式動(dòng)物mRNAOUT    25次
YB130512    一站式磁珠法動(dòng)物mRNAOUT    50次
YB81108    一站式全血mRNAOUT    25次
YB81028    一站式植物mRNAOUT    25次
YB81103    一站式真菌mRNAOUT    25次
YB80817    mRNA提取試劑盒    25次
YB131231    Oligo(dT)纖維素    25mg
YB130976    Oligo(dT)再生溶液    100mL
YB130977    生物素化的Oligo(dT)    5ug
YB130521    鏈霉親和素磁珠    2mL
YB3090    固相RNase清除劑    100mL|250mL
YB130983    氣相RNase清除劑    120mL
YB3091    液相RNase清除劑    1.5mL
YB3110    氧釩核糖核苷復(fù)合物    10mL
YB3100    RNA長(zhǎng)效保存液    1.5mL
YB3290    RNase抑制劑(人源)    400U|2500U
YB130699    RNase 抑制劑(小鼠源)    3000U
YB60201    非酶DNA清除劑    1.5mL
YB70801    非酶DNA清除劑-2    15次
YB90318    柱式DNA清除劑    50次

上海澤葉生物科技有限公司是一家服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域的高新技術(shù)企業(yè)，主要為科研機(jī)構(gòu)、高校、院所及企業(yè)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)研究提供所需要的科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)等。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、材料科學(xué)，通用試劑、藥物合成試劑、手性化合物、催化劑及配體、分析試劑、生物試劑，檢測(cè)試劑等等。
    澤葉生物事業(yè)朝氣蓬勃，公司坐落在松江區(qū)設(shè)有生產(chǎn)研發(fā)基地和龐大的倉(cāng)儲(chǔ)物流中心，憑著一支富有創(chuàng)造天賦的專業(yè)團(tuán)隊(duì)，新技術(shù)、新產(chǎn)品層出不窮。目前，澤葉產(chǎn)品已達(dá)30000 多種，并呈持續(xù)增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)。旨在為科研事業(yè)和工業(yè)領(lǐng)域客戶提供系統(tǒng)的產(chǎn)品資源及配套技術(shù)服務(wù)。
   澤葉生物以“陽(yáng)春布德澤、萬(wàn)物生根葉””的胸懷和精神樹(shù)立【澤葉】，公司秉承客戶至上、服務(wù)至誠(chéng)；以質(zhì)量第一、誠(chéng)信為本的經(jīng)營(yíng)理念，致力于與化學(xué)、醫(yī)藥、分析、食品、能源、材料等領(lǐng)域的客戶建立互信、長(zhǎng)久的合作關(guān)系。