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A. 病毒分離
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1、
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一項采用超速離心技術的研究表明,病毒樣顆粒 (VLPs) 疫苗可同時引起細胞和體液免疫應答。該研究發現,獲得的新型SVA VLP具高度的免疫還原性,其VLP疫苗提供的保護水平與滅活的SVA疫苗水平相似,從而為防御和消除SVA提供比滅活疫苗更優的候選疫苗。Potent Protective Immune Responses to Senecavirus Induced by Virus-Like Particle Vaccine in Pigs (病毒樣顆粒疫苗對豬引起的塞內卡病毒的強保護性免疫反應) Vaccines, 15 September 2020, 8, 532.
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• 儀器型號:Beckman XPN-100 Ultracentrifuge, SW 41 Ti rotor.
• 目的:SVA VLPs的制備及表征。
• 離心條件參數:4 C, 110 000 x g, 3 h.
DOI:10.3390/vaccines8030532
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2、
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一項采用超速離心技術的研究運用多重定量蛋白質組學方法確定在用以共生純化病毒樣顆粒(VLP)的細胞外泌體(EVs)的分泌物中發生的變化。在共同生產的部分中,與免疫激活,抗炎過程和應答氧化反應相關的蛋白質(免疫調節蛋白如ITGB1,ENO3和PRDX5)被鑒定出來, 這些發現提供了VLP胞外環境性質以定義EVs特征及其蛋白質譜的深刻見解,對開發新下游分離策略或將其用作病毒治療佐劑具有潛在意義。Molecular Characterization of the Coproduced Extracellular Vesicles in HEK293 during Virus-Like Particle Production (病毒樣顆粒生產過程中,于HEK293細胞中生成的共生細胞外泌體的分子表征) Journal of proteome. 25 September, 2020, 19, 4516-4532.
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• 儀器型號:Beckman L100 XP Centrifuge, SW 32 rotor.
• 目的:制備高度濃縮純化的HIV-1 Gag VLPs樣品。
• 離心條件參數:4 C, 31 000 rpm, 2.5 h.
https://dx.doi.org/10.1021/acs.jprote me.0c00581
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3、
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一項采用超速離心技術的研究介紹了三種新型以重組型水皰性口炎病毒(rVSV-ZEBOV)為載體的HIV候選疫苗,并在Vero細胞中對三種疫苗的生產進行小規模評估。研究發現,Vero細胞上的生產動力學取決于所用HIV gp表面蛋白,純化的病毒制劑符合WHO對殘留DNA和宿主細胞蛋白質含量的限制。最后,在小鼠實驗中,所有三種rVSV-HIV候選疫苗均可誘導HIV gp140特異性抗體應答。Evaluation of novel HIV vaccine candidates using recombinant vesicular stomatitis virus vector produced in serum-free Vero cell cultures (利用無血清Vero細胞培養物中產生的重組水泡性口炎病毒載體對新型HIV疫苗候選物進行評估) Vaccine, 1 November, 2020.
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• 儀器型號:Beckman Optima 80XP Ultracentrifuge, 70 Ti rotor.
• 目的:制備并純化用于動物實驗的VSV構建體。
• 離心條件參數:30 000 rpm, 3.5 h.
https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2020.10.058
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4、
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一項采用超速離心技術的研究中,研究者利用低溫電子斷層掃描(cryo-ET)技術對受體結合蛋白在與受體結合的膜形成復合物時,其促發F介導的融合的逐步過程進行剖析。借用可促進直接從上清液中檢查新鮮的,具有生物活性的病毒株的網格抗體捕獲方法,以及一系列可在融合過程中捕獲中間狀態的生物學工具,研究者可以直觀地看到當一個原始的,真實的病毒顆粒與目標受體相互作用,及從病毒結合受體的侵入到膜融合的過程。Human parainfluenza virus fusion complex glycoproteins imaged in action on authentic viral surfaces (人副流感病毒融合復合糖蛋白在真實病毒表面的作用中的成像) PLOS Pathogens, 21 September, 2020, 16(9): e1008883.
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• 儀器型號:Beckman L8-80 M Ultracentrifuge, SW 28 rotor.
• 目的:病毒樣品制備與純化。
• 離心條件參數:4 C, 25 000 rpm, 4 h.
https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008883
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5、
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一項采用密度梯度超速離心技術的研究測試了pH 6-8的溶液中銅(Cu)和銀(Ag)對模型RNA和DNA病毒MS2和PhiX 174的影響。結果表明,銅和銀的組合使用在pH 7的MS2消毒中的顯示了協同作用。Inactivation of RNA and DNA viruses in water by copper and silver ions and their synergistic effect (銅和銀離子對水中RNA和DNA病毒的滅活作用及其協同作用) Water Research X, 5 November, 2020.
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• 儀器型號:Beckman Optima L-90 K Ultracentrifuge, SW41 Ti rotor 和SW60 Ti rotor.
• 目的:MS2和PhiX 174噬菌體的制備及純化。
• 離心條件參數:4 C, 32 000 rpm, 20 h.
https://doi.org/10.1016/j.wroa.2020.100077
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B. 外泌體分離
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1、
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一項采用超速離心技術的研究探討了自噬激活的髓核細胞(NPC)和體外分泌microRNA產生的外泌體對髓核(NP)基質降解的保護作用, 并闡述了自噬如何參與預防椎間盤退化(IDD)的新機制。Autophagy‐activated nucleus pulposus cells deliver exosomal miR‐27a to prevent extracellular matrix degradation by targeting MMP‐13 (自噬激活的髓核細胞可遞送外泌體miR-27a通過靶向MMP-13來防止細胞外基質降解) Journal of Orthopaedic research, 10 October 2020, 1-12.
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• 儀器型號:Beckman L-100 XP Ultracentrifuge.
• 目的:外泌體分離。
• 離心條件參數: 120 000 g, 2 h.
DOI: 10.1002/jor.24880
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2、
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一項采用差異超速離心(Differential ultracentrifugation)技術的研究表明,特定的外來體亞型是在Rab11家族成員標記的Drosophila二次細胞和人類癌細胞回收內體多囊泡體中制成的。 此外,Rab11a標記的外泌體從這些區室的優先釋放是由耗盡外源谷氨酰胺的癌細胞觸發的。Glutamine deprivation alters the origin and function of cancer cell exosomes(谷氨酰胺的缺失對癌細胞外泌體源頭及功能的改變)The EMBO Journal. 28 July, 2020.
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• 儀器型號:Beckman 55.2 Ti or 70 Ti rotor.
• 目的:細胞外泌體分離。
• 離心條件參數: 4 C, 100 000 -108 000 g, 2 h.
DOI 10.15252/embj.2019103009
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3、
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一項采用超速離心技術的研究評估了脂質和跨膜酶CD73在刺激皮膚傷口愈合過程中外泌體生物活性中的參與。Exosomes for Wound Healing: Purification Optimization and Identification of Bioactive Components (外泌體用于傷口愈合: 外泌體純化的優化和生物活性成分的鑒定。) Advanced Science. 2020; 1-16.
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• 儀器型號:Beckman Optima XE-90 Ultracentrifuge, Type 45 Ti fixed-angle rotor.
• 目的:細胞外泌體分離。
• 離心條件參數: 4 C, 100 000 x g or 150 000 x g, 70 min.
DOI: 10.1002/advs.202002596
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4、
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一項采用超速離心技術的研究首次證明了長角血蜱在唾液中分泌類似于外泌體的胞外囊泡并對其進行蛋白質組學分析,表明血蜱唾液衍生的外泌體樣囊泡在宿主-寄生蟲關系中可能起重要作用。Proteomic Analysis of Exosome-Like Vesicles Isolated From Saliva of the Tick Haemaphysalis longicornis (從長角血蜱唾液中分離出的外泌體樣囊泡的蛋白質組學分析) Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 22 October 2020, Volume 10: 542319.
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• 儀器型號:Beckman Optima L-100 XP Ultracentrifuge, SW 60 (44.5) rotor.
• 目的:H. longicornis唾液中外泌體的分離。
• 離心條件參數: 1. 初步分離:4 C, 140 000 g, 3 h; 2. 洗滌參數:150 000 g, 2 h; 3. 非連續性梯度離心: 250 000 g, 18 h.
DOI: 10.3389/fcimb.2020.542319
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5、
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一項采用超速離心技術的研究使用靜電力顯微鏡通過探測單個囊泡來研究神經母細胞瘤分泌的囊泡的物理特性。有趣的是,我們觀察到當將更高濃度的Aβ42低聚物培養細胞時,外泌體的表面電荷就會更高。該結果表明,隨著細胞培養基中Aβ42濃度的增加,外泌體包含更多的Aβ42,這暗示這些外泌體可能充當Aβ42的轉運囊泡。Nanoelectrical characterization of individual exosomes secreted by Aβ42-ingested cells using electrostatic force microscopy (使用靜電力顯微鏡對由Aβ42攝取的細胞分泌的單個外泌體進行納米電表征) Nanotechnology. 12 October, 2020, 32 025705.
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• 儀器型號:Beckman Optima L-90 K Ultracentrifuge, Type 70 Ti rotor.
• 目的:細胞外泌體分離。
• 離心條件參數: 4 C, 100 000 x g, 2 h.
https://doi.org/10.1088/1361-6528/abba58
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C. 脂質體分離
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1、
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一項采用超速離心技術的研究提供了原理證明,以進一步促進對自主組裝的混合脂質納米顆粒的研究,將其作為核酸的有前景的遞送工具,例如miRNA。Hybrid lipid self-assembling nanoparticles for brain delivery of microRNA (用于microRNA的大腦遞送的自主組裝的混合脂質納米顆粒) International Journal of Pharmaceutics, 02 August 2020, 588 119693.
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• 儀器型號:Beckman Optima Max E Ultracentrifuge.
• 目的:將miRNA裝載入自主組裝的混合脂質納米顆粒。
• 離心條件參數: 4 C, 80 000 rpm, 40 min.
https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2020.119693
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2、
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一項采用超速離心技術的研究中,詳細描述了一種互補的無細胞蛋白質合成(CFPS)方法,為制備水通道蛋白脂蛋白體樣品提供了三種不同的策略。Functional Analysis of Aquaporin Water Permeability Using an Escherichia coli-Based Cell-Free Protein Synthesis System (使用基于大腸桿菌的無細胞蛋白質合成系統進行水信道蛋白水滲透性的功能分析) Materials Today Bio, 31 July, 2020, 100071.
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• 儀器型號:Ultracentrifuge and suitable rotors (Beckman Coulter).
• 目的:蛋白質樣品(水信道蛋白及無細胞蛋白質)的制備及純化。
• 離心條件參數: 1. (水信道蛋白的制備及純化)4 C, 20 000 x g, 30 min. 2. 用于脂質-無細胞蛋白質合成反應的樣品制備:18 000 x g, 30 min (初步分離); 18 000 x g, 10 min (分離制備).
DOI: 10.3389/fbioe.2020.01000
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3、
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一項采用超速離心技術的研究通過生化和NMR方法表征了Vav2-SH2結構域與脂質和Y594磷酸化EphA2 JM的結合。這項研究提供了一種方法來研究復雜膜環境下的蛋白質-蛋白質相互作用,也為今后研究膜環境在跨膜蛋白質-蛋白質相互作用中的意義提供了一種觀點。Biochemical and NMR characterization of the interactions of Vav2–SH2 domain with lipids and the EphA2 juxtamembrane region on membrane (Vav2-SH2結構域與脂質和膜上EphA2近膜區相互作用的生化及NMR表征) Biochemical Journal, 12 October 2020, 477: 3791-3801.
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• 儀器型號:Beckman Optima MAX-XP Ultracentrifuge.
• 目的:脂質體的制備。
• 離心條件參數: 4 C, 50 000 g, 30 min.
https://doi.org/10.1042/BCJ20200300
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4、
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一項采用超速離心技術的研究表明,將胺官能化的納米金剛石(NDs)封裝在脂質體中并進行了研究,以觀察其光致發光性質的變化。研究結果表明,功能化的NDs的光致發光特性發生了顯著變化,并且在脂質體包封后更有潛力。該發現可用于開發新型水分散型熒光雜交體脂質體-NDs,并具有用于診斷和治療的藥物封裝能力(脂質體療法)。也可以考慮具有為其他生物醫學應用定制其相應可能性的全光學傳感器。Photoluminescent properties of liposome-encapsulated amine-functionalized nanodiamonds (脂質體封載的胺官能化納米金剛石的光致發光特性) Nano Express, 27 October 2020, 030009.
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• 儀器型號:Beckman Coulter 90 L Ultracentrifuge.
• 目的:脂質體的分離純化及制備。
• 離心條件參數: 4 C, 38 000 rpm, 1h.
https://doi.org/10.1088/2632-959X/abc1c5
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5、
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一項采用超速離心技術的研究檢測了統計偶聯分析(SCA)是否可以應用于菱形蛋白酶(分布最廣泛的膜蛋白),以識別獨立進化以獲得特定功能的氨基酸“區段”,揭示其功能進化的基礎。Decoding the Functional Evolution of an Intramembrane Protease Superfamily by Statistical Coupling Analysis (通過統計耦合分析對膜內蛋白酶超家族的功能進化進行解碼) Structure, 3 November 2020, 28, 1-8.
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• 儀器型號:1. 細胞膜的分離:Beckman Optima Ultracentrifuge, a 70 Ti rotor. 2. 實時動力學分析實驗:Optima MAX-XP Ultracentrifuge.
• 目的:1. 細胞膜的分離;2. 實時動力學分析實驗中蛋白脂質體的分離與收集。
• 離心條件參數: 1.細胞膜分離:10 C, 370 500 x g, 30 min. 2. 蛋白脂質體的分離:600 000 x g, 30 min.
https://doi.org/10.1016/j.str.2020.07.015
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