近日,中國學者熟知的PLOS ONE和PLOS Biology在投稿指南里指出,7月1日起,要求所有作者提供WB相關的原始數據,并存放在可用的數據庫中,提供可查詢的信息。
在《JBC》的作者投稿要求中也需要提供原始數據作為評審的依據。如果稿件正在審核中,未按照要求提供或拒絕提供這些數據的作者的文章將成為拒收理由。
http://www.jbc.org/site/misc/edpolicy.xhtml
在權威雜志《nature》的要求中,作者可能會被要求提交原始的,未經處理的圖像。https://www.nature.com/nature-research/editorial-policies/image-integrity
以上列舉了幾種期刊關于提交原始圖像的信息,因為WB由于其從原始數據到最后成文展示,本身即需要裁減排版,此過程中,造假的空間就會很大。還有很多知名期刊也有類似的要求,防止WB數據造假。
Azure凝膠成像系統提供給客戶最真實的原始的tiff圖片,而不是經過軟件自行修改,編輯的看著好看的圖片,例如插值圖片,插值圖像灰度值有明顯的不連續性,圖像質量損失較大,會產生明顯的馬賽克和鋸齒現象。自動優化圖片,軟件類似PS的手法,在形成圖像時進行自動優化,消除背景等方法,這樣會使圖片丟失大量信息,影響數據的真實性。
Azure公司秉承實事求是,尊重科研的態度,Azure凝膠成像系統提供給客戶最原始的16bit的tiff圖片,tiff是最復雜的一種位圖文件格式。tiff是基于標記的文件格式,它廣泛地應用于對圖像質量要求較高的圖像的存儲與轉換。由于它的結構靈活和包容性大,它已成為圖像文件格式的一種標準。信息量大,真實反映實驗結果。
以上和大家說了原始圖片的期刊要求,我們看看關于定量數據的要求:
JBC期刊雜志要求使用總蛋白定量,傳統的單一蛋白會有潛在的不穩定表達的風險,影響定量的準確性:http://jbcresources.asbmb.org/collecting-and-presenting-data#basics
在《Nature》和《Cell》雜志中鼓勵在一張印跡膜上進行印跡實驗,平行膠因為體系和條件的不同會影響定量的準確性,熒光方法更符合。《Cell》http://crosstalk.cell.com/blog/common-pitfalls-in-figure-preparation
化學發光方法由于其自身的半定量和一次僅能進行單一的信號采集,所以才會有這么多學術造假的文章出現,化學發光檢測的局限性就體現出來了。之后科學家為了尋求解決方法,熒光western blot檢測應運而生。
熒光Western blot使用熒光染料標記的二抗進行檢測,膜上的靶標蛋白濃度與可見熒光信號強度呈線性關系,實現真實可靠的定量分析。熒光染料發射光譜不同,因此在一張印跡膜上可實現多重檢測。在無需剝離和二孵育條件下,進行上樣量質控,可以分析翻譯后修飾蛋白。
因此當您進行如下實驗室,選擇熒光檢測方法,妥妥的:
> 同時檢測多種蛋白
> 研究翻譯后修飾蛋白
> 同一印跡膜的上樣質控
> 精確定量western blot實驗
綜上所述,采用現在動態范圍更寬的多重熒光western blot檢測方法來進行western blot檢測,實現真正的定量要求,無需剝離膜和二次孵育,進行上樣質控,目標蛋白和內參蛋白在同一張膜上,就不會發生和避免上面數據造假的情況發生,更容易被期刊雜志接收。
Azure凝膠成像系統秉承實事求是,尊重科研的態度,提供給客戶最真實的原始的數據。