Apogee助美國FDA推出大腸桿菌單細胞快速檢測新方案

瀏覽次數：2809　發布日期：2017-9-14　來源：本站　本站原創，轉載請注明出處

在食品衛生行業，大腸桿菌早已成為國際公認的衛生監測指示菌。近年來，由于大腸桿菌O157:H7引起的食源性疾病疫情頻發，給人類健康帶來嚴重危害，大腸桿菌快速檢測技術亟待發展。一般來說， O157:H7感染劑量10個細胞就夠了，對于易感人群來說，O157:H7感染劑量細胞數可能會更少。傳統平板計數法，通常需要花費幾天的時間來檢定O157:H7。污染情況。例如，通過使用選擇性培養基，抑制背景微生物生長，選擇性擴大培養目標菌株，然后通過形態學加以觀察檢定，檢測過程不僅耗費時間長，靈敏度也難以保證，并通常伴有較高的假陰性結果。對此，新的檢測技術，如ELISA，PCR，微陣列探針以及流式細胞儀檢測法等不斷更新改進，特別是流式細胞儀檢測法因其操作簡單，容易進行快速，多參數的高通量檢測，日益備受關注。近日，美國食品和藥物管理局（FDA）刊發新文，采用Apogee超靈敏納米流式分析系統，完善出大腸桿菌單細胞快速精準檢測新方案。

實驗方案采用Apogee超靈敏納米流式分析系統，使得通常需要幾天完成的實驗，縮短至9個小時便可完成25個菠菜基質樣品的大腸桿菌O157:H7污染情況檢測，很好的解決了以往分析耗費時間長的問題；同時，文章對比實驗顯示：納米流式分析法可明顯提高檢測靈敏度：完成大腸桿菌單細胞污染的樣品檢測，納米流式分析法比傳統檢測法靈敏度高出三倍以上（65% vs 20% 陽性復檢率）。實驗方案列有納米流式分析的所有準備工作，特別指出如何通過優化過程，省卻大量離心和濃縮過程，提高檢測效率和分析靈敏度，并且樣品制備相關優化過程，均已得到美國FDA專家顧問Thomas Hammack的認可。而整個實驗方案的關鍵技術環節在于，較好地利用Apogee納米流式分析系統較寬的檢測通道避免了背景大顆粒堵塞，省去了樣品離心，分離及濃縮的過程，然后結合超高信噪比的散射光和熒光檢測靈敏度，以及出廠優化的細菌分析用儀器設定參數，獲得對O157:H7單細胞散射光和熒光信號的最佳檢測性能（圖1），真正意義上為食品衛生行業大腸桿菌單細胞檢測建立了省時，省力，靈敏，精確的檢測新方案。

圖 1，左圖，高分辨率散射光識別檢測大腸桿菌E. coli O157:H7；
右圖，特異性熒光染料檢測大腸桿菌 E. coli O157:H7

參考文獻：

Williams A J, Cooper W M, Ramsaroop S, et al. Rapid Flow Cytometry Detection of a Single Viable Escherichia coli O157: H7 Cell in Raw Spinach Using a Simplified Sample Preparation Technique[J]. Frontiers in Microbiology, 2017, 8: 1493

Apogee超靈敏納米流式分析儀簡介：
超靈敏納米流式分析儀是英國Apogee Flow廠家研發，它獨有的專行光學設計使其可檢測最小80nm的小顆粒，并擁有10nm 的分辨率，使其成為市場上唯一可檢測小于100nm大小顆粒的流式細胞儀。英國Apogee Flow的技術早前廣泛為美國軍方用于戰場上的快速微生物檢測。繼之前北京中科院微生物所和北京計量研究所引入了Apogee超靈敏納米流式分析儀為微生物作快速流式檢測和定量，最近上海第二軍醫大學轉化醫學中心的老師也選購了Apogee最新的A50-Micro Plus型號來進行外泌體等微顆粒研究的科研工作。而每年在美國舉行的國際胞外囊泡大會上，更有不少的科學家的研究中采用了Apogee超靈敏納米流式分析儀來作胞外囊泡研究。由此可見這種新技術在小顆粒檢測中確是帶來不少優勢。