在肺小動脈血管重構過程中,凋亡抵抗表型的血管內皮細胞具有高增值活性,其過度增值可促進肺動脈血壓升高和右心功能衰竭。這種生理異常,在臨床上定義為肺動脈高壓(PAH),屬于異質衰竭型疾病。
血管內皮細胞在維持血管的正常功能方面有著重要的作用。內皮細胞微粒是內皮細胞激活或凋亡時從其表面通過出芽釋放的微囊泡(100-1000nm),攜帶特定的細胞激活,細胞損傷或細胞凋亡相關的生物信息。一系列的研究表明,血管內皮細胞微粒在炎癥、血管損傷和血栓形成中發揮著重要的生物學作用,并且在患有心血管疾病、糖尿病和肺部疾病等疾病患者血液中均發現內皮細胞微粒水平有增加,具有作為臨床診斷生物標記物的巨大潛力。然而,由于檢測技術的限制,使得微粒作為臨床診斷生物標記物的發掘工作面臨著嚴峻的挑戰。近來,專門針對小顆粒物質分析英國Apogee超靈敏納米流式分析儀,越來越多的被應用于疾病相關微粒分析過程,為重大疾病早期生物標記物的無創檢測發掘工作提供了便利。日前,美國科學家Jonathan A. Rose等人在研究肺動脈高壓潛在生物標記物時,將Apogee納米流式分析系統成功應用于尿液內皮細胞微粒的檢測(圖1),為臨床患者的無創檢測奠定了基礎。研究發現在肺動脈高壓患者尿液中檢測到的內皮細胞CD144+微粒含量顯著高于正常人(圖2A),并且CD144+微粒含量與評估右心室功能的三尖瓣環收縮期位移(TASPE)指標呈正相關(圖2B),預示著尿液中的內皮細胞CD144+胞外微粒可以作為肺高壓病人右心室功能臨床診斷的潛在標記物。
Apogee超靈敏納米流式分析儀,已被歐洲國家計量研究協會評定為檢測細胞外微囊泡的最靈敏分析系統。在每年國際胞外微囊泡的研究報告大會上,采用流式分析法分析微囊泡的研究工作,絕大部分都是采用的 Apogee納米流式分析系統。這主要是由于:它克服了傳統流式散射光檢測下限的限制(檢測下限為500nm,在分析占據微粒絕大部分比例的500nm以下微粒時會受到明顯限制),能夠檢測低至80nm的微粒,同時擁有10nm的超高分辨率。這種技術優勢,使得 Apogee超靈敏納米流式分析不僅只借助散射光就可以精確地分析納米級的微粒,也可以為熒光標記檢測微粒提供必不可少的參考信息。由于細胞外微粒屬于膜結構類的囊泡,分析樣品中的細胞碎片等雜質將會對熒光標記的特異性產生極大的干擾。熒光標記檢測微粒時,若想得到準確的信息,必須借助散射光排除非預期大小的干擾性物質。此外,微粒表面抗原表達豐度和抗原抗體結合效率也會限制微粒的熒光標記檢測,這在很大程度上限制了傳統流式的微粒檢測應用。因此,結合精確的絕對技術能力和專有的折射率校正功能,Apogee超敏納米流式分析儀已成為納米級細胞外微粒的最理想分析系統。
圖1,尿液中內皮細胞微粒的納米流式檢測
圖A,散射光檢測微粒群圈門;圖B, Annexin-V+微粒群圈門;圖C,Annexin-V+和CD144+微粒圈門;圖D,Annexin-V熒光染料對照背景圈門;圖E,CD144熒光染料對照背景圈門;圖F,CD144抗體同型對照背景圈門。
圖2,肺動脈高壓病人內皮細胞CD144+微粒含量高于正常人的含量
圖A,PAH病人中CD144+微粒含量顯著高于正常人CD144+微粒含量。圖B,CD144+微粒含量與評估右心室功能的三尖瓣環收縮期位移(TASPE)檢測指標呈正相關。
參考文獻:
Rose J A, Wanner N, Cheong H I, et al. Flow Cytometric Quantification of Peripheral Blood Cell β-Adrenergic Receptor Density and Urinary Endothelial Cell-Derived Microparticles in Pulmonary Arterial Hypertension[J]. PloS one, 2016, 11(6): e0156940.
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