2013年2月17日，第十屆烏普薩拉電子捕獲與電子轉移裂解國際會議(UPPCON 2013)在北京友誼賓館召開，由北京生命科學研究所(NIBS)和中科院計算技術研究所合作承辦。UPPCON 2013是一個偏重質譜基礎研究的國際會議，圍繞離子-離子和離子-電子的氣相反應的理論、實驗、儀器開發和應用，數位最著名的資深的學者介紹他們最新的研究工作。

 

圖：會議現場

圖：賽默飛展臺
 


圖：賽默飛科技ETD技術發明人 John E.P.Syka博士

   賽默飛ETD技術發明人John E.P. Saka博士的報告題目是《Instrumental Approaches to Improving ETD Spectral Quality》，介紹了ETD技術的最新進展。

    ETD是基于離子/離子氣相化學一種碎裂多肽的新方法，是鑒定蛋白及其翻譯后修飾強有力的工具。ETD通過從陰離子自由基到質子肽轉移電子的化學能量將肽碎裂，引發多肽骨干分裂，獲得蛋白質翻譯后修飾的重要序列信息。

圖：LTQ Orbitrap 系統結構 

　傳統的誘導活化裂解(CAD)常用來鑒定蛋白，并試圖確定和找到它們修飾的位點，但CAD技術有其固有的缺點。與線性離子阱的結合使用的ETD，可以很容易鑒定用CAD不能鑒定的多肽。

　ETD 是由電子捕獲解離ECD 發展而來，但ECD僅能在高端的FT ICR 高分辨質譜上使用，而ETD 的誕生，可以較為經濟的在低分辨離子阱質譜上實現同樣的功能。

   報告討論了在質譜上提高ETD產生離子的數量的方法。分別從兩個方面，一是最大化進入ETD的離子數量，一是最大化ETD產生的m/z離子的數量。

圖：賽默飛應用中心 張偉博士　

   賽默飛應用中心張偉博士作了題為《Method Development of Typical ETD Experiments for Proteomics Applications》的報告。

　張博士認為，ETD的發展非常迅速，能獲得更豐富的系列碎片。在蛋白質組學等領域，ETD與CID是很好的互補，30%蛋白質組學的用戶都在使用這個技術。

　ETD產生離子的反應機理
   ETD產生離子的反應機理很簡單，當電子轟擊氮氣的時候，會產生一個熱電子，熱電子很容易被捕獲，肽段發生斷裂反應。相對于傳統的CAD技術，ETD提供了更穩定的方法來定性PTMs，鑒定大型多肽或甚至整個蛋白質。ETD能夠將普通翻譯后修飾的多肽，或者多個堿性殘基的多肽甚至整個蛋白質生成離子。 ETD也可以輕易碎裂含有二硫鍵的的多肽。

圖：ETD中電子轉移裂解原理

　ETD達到最佳狀態的途徑
　ETD實驗達到最理想的狀態，主要通過四個部分的調節，一是對ETD源的調諧和優化，二是建立合適的Tune文件，三是建立分析方法，最后是數據處理、搜庫軟件。

　ETD應用的例子
   CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT的磷酸化蛋白質組的分析。從老鼠睪丸體中取出全蛋白，通過胰蛋白酶分解后，用IMAC富集，然后數據處理就用PD Workflow。通過一系列的數據處理之后就得到所有譜圖的鑒定結果。CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT三種策略也是很好的互補。

 

圖：CID+ETD、CID-NL-ETD、DDDT的互補性

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